1．(2019年四川成都市七中二诊)成都七中的生物兴趣小组在寒假以“蛋白质的提取和分离”和“泡菜中亚硝酸盐含量的测定”为课题进行了研究性学习。分析并回答以下问题： (1)样品处理中红细胞的洗涤要用_____反复冲洗、离心。影响红细胞洗涤效果的因素包括_____。 (2)血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是_____，若要尽快达到理想的透析效果，可以_____(写出一种方法)。 (3)蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率主要取决于_____因素。 (4)装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现气泡必须重装。这是因为_____。 (5)亚硝酸盐的定量测定可以用_____法，在制备样品处理液过程中加入氢氧化铝乳液的作用是_____。 解析：(1)洗涤红细胞所用的溶液是生理盐水，根据渗透作用原理，将红细胞置于低渗溶液中，红细胞会吸水涨破，释放出血红蛋白。影响红细胞洗涤效果的因素包括洗涤次数、离心时间和离心速度。 (2)血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是除去样品中的小分子杂质；可通过增加缓冲液的量或及时更换缓冲液等方法缩短透析时间，能尽快达到理想的透析效果。 (3)净电荷的多少和分子的大小可以决定蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率。 (4)装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，一旦发现气泡必须重装。 (5)测定亚硝酸盐的含量可以用比色法，在制备样品处理液过程中加入氢氧化铝乳液的作用是除去滤液中的色素，使滤液变得无色透明。 答案：(1)生理盐水 洗涤次数、离心时间和离心速度 (2)除去小分子杂质 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液 (3)净电荷的多少和分子的大小 (4)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 (5)比色 除去滤液中的色素，使滤液变得无色透明 2．回答下列与固定化酶和固定化细胞有关的问题： (1)利用固定化酶技术生产高果糖浆时，需要使用_____酶，它能持续稳定地将葡萄糖转化为果糖。 (2)固定化细胞时，通常采用_____(填“包埋法”或“化学结合法”或“物理吸附法”)；与固定化酶相比固定化细胞的优势在于_____(答两点即可)。 (3)制备固定化酵母细胞时，需要将休眠状态的干酵母加入_____，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置一定的时间，使其_____，此时酵母菌的细胞体积会变大。 (4)固定化酵母细胞使用海藻酸钠作载体时，溶化后的海藻酸钠溶液需要经_____，才可加入酵母细胞混合均匀。在制作凝胶珠时应缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的_____溶液中，并观察液滴在溶液中形成凝胶珠的情形。如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母菌细胞数目会偏_____。 解析：(1)高果糖浆的生产需要使用葡萄糖异构酶，它能将葡萄糖转化成果糖。(2)因为细胞个大，酶分子较小，个大的细胞难以被吸附或结合，个小的酶容易从包埋材料中漏出，所以固定细胞常用包埋法，而固定酶则常用化学结合法或物理吸附法。与固定化酶相比固定化细胞的优势在于：免去了破碎细胞提取酶的手续；酶在细胞内的稳定性高，完整细胞固定化后酶的活性损失少；固定化细胞制备的成本比固定化酶低。(3)制备固定化酵母细胞时，需要将休眠状态的干酵母加入蒸馏水中，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置一定的时间，使其活化，即由休眠状态重新恢复正常的生活状态。(4)加热溶解海藻酸钠时需注意用小火间断加热，然后将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温后，才能和酵母混合均匀，以免使酵母菌失去活性。在制作凝胶珠时应缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，CaCl2的作用是使海藻酸钠形成凝胶珠。如果海藻酸钠溶液浓度过低，则制得的凝胶珠颜色偏浅，固定的酵母菌数目偏少。 答案：(1)葡萄糖异 ... ...
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