第1讲 无菌操作技术实践 1.微生物的分离和培养 2．某种微生物数量的测定 3．微生物的应用 4．实验：微生物的分离和培养 1.分析培养基的成分及其作用；平板划线法和稀释涂布平板法的异同；选择培养基和鉴别培养基的区别。（科学思维） 2.设计实验探究微生物培养的条件及如何分离某种微生物等。（科学探究） 3.关注有害微生物的控制及宣传健康生活方式等。（社会责任） 微生物的分离和培养 1．相关技能、技术和方法 (1)无菌操作的技能———灭菌 ①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。 ②作用：微生物分离和培养的基础。 ③关键：防止外来杂菌的入侵。 (2)配制培养基 ①培养基概念： 为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。 ②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。 (3)接种微生物 ①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。 ②接种方法和常用工具(连线) 接种方法 常用工具 Ⅰ.涂布平板接种 a．接种针 Ⅱ.穿刺接种 b．接种环 Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器 Ⅳ.平板划线接种 [答案] Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b 2．大肠杆菌的接种与分离培养 (1)配制牛肉膏蛋白胨培养基 其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。 (2)斜面接种和培养大肠杆菌 ①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。 ②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。 (3)平板划线分离和培养大肠杆菌 ①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。 ②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。 1．选择无菌技术的原则 (1)考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。 (2)考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。 2．微生物的培养基 (1)培养基的成分 营养要素 来源 功能 碳源 无机碳源 CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物 a.构成细胞物质和一些代谢产物 b.既是碳源又是能源(有机碳源) 有机碳源 糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等 氮源 无机氮源 无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 有机氮源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 生长因子 维生素、氨基酸、碱基 a.酶和核酸的组成成分 b.参与代谢过程中的酶促反应 水 培养基、大气、代谢产物 不仅是良好的溶剂，还是结构物质 无机盐 培养基、大气 细胞内的组成成分，生理调节物质；某些化能自养型细菌的能源；酶的激活剂 (2)根据理化性质对培养基的分类 种类 特点 应用 物理 性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 固体培养基 加凝固剂 微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏 化学 成分 天然培养基 含化学成分不明的天然物质 工业生产 合成培养基 培养基成分明确或用一定化学物质配制 分类、鉴定 (3)根据功能可分为选择培养基和鉴别培养基 类型 实例 选择培养基 培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌 以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌 不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物 石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的 培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物 鉴别培养基 伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈黑色) 1．大肠杆菌纯化方法的比较 主要方法 平板划线法 稀释涂布平板法 纯化原理 通过接种环在琼脂固体培养基的表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分 ... ...
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