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课件网) 第四部分 浅尝现代生物技术 实验目的 1、进行菊花的组织培养 2、尝试植物激素的应用 通过必修课的学习，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？ 组织培养 无性繁殖 一、基础知识分析 （一）组织培养的生殖方式 （二）植物组织培养的基本过程 知识要点: 1.细胞分化的概念； 2.离体植物细胞的脱分化和再分化。 （三）影响植物组织培养的因素 影响植物组织培养的因素有培养基配制、外植体的选取、消毒、接种、培养、移栽和栽培等。 (1)外植体选取：不同的植物组织 同一植物的不同材料 (2)营养 (3)环境条件(pH、温度、光照) (4)植物激素 (5)消毒 （四）生长素与细胞分裂素使用配比对实验结果的影响 使用配比 实验结果 细胞分裂素>生长素浓度 诱导芽的生成 细胞分裂素=生长素浓度 愈伤组织继续生长而不分化 细胞分裂素<生长素浓度 诱导根的生成 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培 养 栽培 移 栽 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 1、配制母液 按照MS培养基成分表, 分别配制培养基的母液。 (1)大量元素母液(10倍液) 分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的（60-80℃）蒸馏水中。（一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水，定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用）。 (2)微量元素母液(100倍液) (3)铁盐母液（100倍液） (4)有机物质母液(100倍数) (5)生长素母液 (6)细胞分裂素母液 注意:配制培养基时，一定要注意调节pH。 MS培养基配制方法 你能说出各种营养物质的作用吗？同微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 (1) 取1000ml烧杯一只，加大量元素10倍母液100ml，微量元素100倍母液10ml，铁盐100倍母液10ml,有机物质100倍母液10ml。此外,根据培养材料和实验目的还要附加一定量的生长素,细胞分裂素及蔗糖等,然后加水至1000ml,待蔗糖充分溶解后用1mol/L 的NaOH或HCl调酸碱度为pH5.8,最后加入琼脂粉6.5g,如用琼脂条,则要加8g。 2.培养基配制与分装： (2)将盛有培养基的烧杯在电磁炉上，煮至琼脂完全融化，补加蒸馏水至1000ml。 将配制好的培养基分装到培养用三角瓶中，每只100ml三角瓶约装40ml培养基。 分装时要避免把培养基倒在瓶口上，否则培养时容易引起杂菌污染。 （1）把装好的培养基的三角瓶放入高压灭菌锅中，盖好锅盖。 （2）设置灭菌温度参数为121℃，20min，开始灭菌。 3、灭菌 无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键． （二）外植体（离体组织）消毒 注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。 1、70﹪酒精中浸泡10min，无菌水冲洗 2、5%次氯酸钠溶液中浸泡，无菌水冲洗 3、用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min，无菌水冲洗 4、超净台中用无菌水多次冲洗 （三）切段后接种 1、先用肥皂洗手，穿上工作服，戴上口罩和工作帽。 2、放入培养瓶和灭菌后的接种用具(镊子、解剖刀、接种针)，把镊子、解剖刀、接种针插入内盛70%酒精的广口瓶中。 3、在酒精灯火焰旁，打开三角瓶，把花茎用无菌解剖刀切成几段，每段至少有一张叶片 4、切段插入培养基，诱导愈伤组织，盖上封口膜。 ... ...
