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课件网) 专题二 微生物的培养与应用 课题二 土壤中分解尿素的细菌 的分离与计数 1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 上一节课我们已经学习了培养基的配制以及接种技术，现在我们就来学习如何从土壤中将我们需要的微生物进行分离。 导入新课 尿素[CO(NH2)2]———重要的农业氮肥。 只有被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 原因: 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶。 你能想一想怎样能将分解尿素的细菌从土壤中分离出来吗？ (一)筛选菌种 1 实例： 寻找耐高温的DNA聚合酶 PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 Taq细菌 启示： 寻找目的菌种时要根据它对_____，到相应的环境中去寻找。 生存环境的要求 筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物， 使耐热的Taq细菌保留下来。 2 实验室中微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 思考:1.该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 2.从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 3. 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。 3 选择培养基： 在微生物学中，将允许_____，同时_____生长的培养基。 特定种类的微生物生长 抑制或阻止其他种类微生物 结果： 培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养分离。 如何对细菌进行计数？ （1）显微镜直接计数： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 （2） 稀释涂布平板法（间接计数） 101 102 103 104 105 106 (二)统计菌落数目 方法：运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。 原理：1个菌落←1个活菌 ①选择菌落数在30～300的平板上计数。 ②需培养计算出三个或三个以上的平板菌落,求平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 注意事项： 讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板） 第二位同学：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 (三)设置对照实验 阅读课本 “（三）设置对照”一段讨论教材中提出的问题。 设置对照的目的： 排除实验组中非测试因素对试验结果的影响，提高实验结果的可信度。 (1)A同学出现此结果的可能原因？ ⑴土样不同 ⑵培养基污染 (或混入了其他的含氮物质) (2)设置对照实验，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素？ 这个实例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验。 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明_____；如果结果不同，则证明A同学存在_____。 A无误 培养基的配制有问题 实验流程： 样品稀释涂布平板 微生物的培养与观察 菌落计数 土壤取样 制备培养基 （一）土壤取样 从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 “微生物的天然培养基” 数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌 （二）制备培养基 制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基 相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数 ... ...
