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课件网) X 微生物 → 纤维素酶 生物燃料？？？ ㈠纤维素与纤维素酶 1.纤维素: 是一种由葡萄糖首尾相连而成的 高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。 一、基础知识 纤维素结构式 （1）植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。 （2）棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 植物多糖有_____和_____两种。对人类而言，饮食中的_____是人体主要能量来源（被消化成_____而被吸收），而纤维素完全不能被消化（但有促进肠道蠕动，利于排便等重要功能） 淀粉 纤维素 淀粉 葡萄糖 2.纤维素酶 纤维素酶是一种_____酶，它至少包括三种组分，即_____、_____、_____。前两种酶使纤维素分解成_____，第三种酶将纤维二糖分解成_____。正是在这三种酶的协同作用下，纤维素最终被水解成 ，为微生物的生长提供营养. 复合 CX酶 C1酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 葡萄糖 纤维二糖 C1酶： 从糖链的末端开始切掉两个葡萄糖分子， 产生纤维二糖 葡萄糖苷酶：将纤维二糖分解为葡萄糖 CX酶： 作用于糖链的内部使之断裂成糖链片段 1mL 滤纸 消失 滤纸 无变化 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 自变量？ 10mL ？？ 11mL （70-80 U/mL） 将两支试管固定在50mL锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h 1U表示1个酶活力单位， 是指在温度25℃，其他反应条件，如pH等，均为最适的情况下， 在1min内转化1mMol的底物所需的酶量 试管 滤纸条 缓冲液PH=4.8 纤维素酶 条件 结果 对照组 1cm× 6cm 实验组 1cm× 6cm 10mL （2）筛选原理： （1）筛选方法：刚果红染色法. 通过_____对微生物进行筛选 刚果红（CR）是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。纤维素被分解后无法形成刚果红—纤维素复合物，形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。 颜色反应 （二）纤维素分解菌的筛选 一、基础知识 二、实验设计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 思考：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 土壤取样 梯度稀释 将样品涂布到选择培养基上 利用酚红指示剂鉴别 思考：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 本实验流程与课题2的流程的区别如下。课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。 2.分离的结果是否一致 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，不同同学也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。 四、实验评价 1、为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_____ ___实验，纤维素酶的发酵方法有_____ 发酵和_____ 发酵。 2、纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的_____ 含量进行定量测定。 发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 五、进一步鉴定 葡萄糖的测定： 斐林试剂检验→砖红色沉淀。 练一练： 1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁 D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖 B 2、刚果红能与哪项物质形成红色复合物 ( ) A．纤维二糖 B．纤维素 C．葡萄糖 D．麦芽糖 3、选择培养的结果：培养液变 ( ) A．清澈 B．浑浊 C ... ...
