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课件网) 讨论2：如何证明他们是遗传物质？ 讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？ 讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？ 自主学习（实验思路） 1、DNA从哪提取？（用什么方法破碎细胞而DNA不受破坏） 2、怎样将DNA与细胞中的其他生物大分子分离？ 3、怎样鉴定我们提取的DNA？ 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 阅读课本54页，思考： 提取生物大分子的基本思路是什么？ DNA主要与哪些生物大分子分离？ 方法1：根据DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，提取DNA 结合图，思考回答课本的问题 1、DNA在0.14 mol／L NaCl溶液中溶解度最低而蛋白质此时的溶解度最高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到初提取的滤出物DNA。 2、利用DNA不溶于酒精，细胞中的某些蛋白质可溶于酒精的特点，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 3、蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 4、大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性（蛋白质变性后溶解度降低而产生沉淀） 5、洗涤剂能够瓦解细胞膜（脂质），但对DNA没有影响（在植物材料中提取DNA使用） （二）检验原理： 1、DNA遇二苯胺（沸水浴）呈蓝色 2、甲基绿与DNA结合，呈绿色 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 阅读55页的实验材料 材料：新鲜的鸡血 原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。 ①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得 ②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液(DNA释放和溶解） 此步为实验成功以否的关键 1、破碎动物细胞的方法——— 2、破碎植物细胞的方法——— 渗透吸水胀破 洗涤剂+食盐搅拌研磨 ？ ？ 不充分？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂； 加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂， 从而释放出DNA 洗涤剂———离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐———NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 研磨不充分———使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 （三）去除滤液中的杂质（DNA的纯化） 阅读课本55页的三个方案 下面以鸡血为实验材料粗提取DNA并鉴定 DNA的实验过程，请观察并总结实验步骤 新鲜的鸡血 鸡血细胞 离心 1、获取实验材料 柠檬酸钠溶液 ？ 用吸管除去离心管上部的澄清液 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液（DNA的释放） 鸡血细胞 足量的蒸馏水 玻璃棒一个方向 快速充分搅拌 细胞破裂 一层纱布过滤（1） 含染色质的滤液 3、去除滤液中的杂质，获取DNA的粗提取物 （DNA的纯化） 染色质滤液 2mol/LNaCl溶液 玻璃棒一个方向搅拌 析出DNA黏稠物 DNA溶解，染色质中的DNA与蛋白质分离 慢加足量蒸馏水：NaCl溶液浓度由2mol/L变0.14mol/L DNA溶液 多层纱布过滤(2) 纱布上DNA的黏稠物 2mol/L NaCl溶液 二层纱布过滤 含DNA的NaCl滤液 含DNA的NaCl滤液 冷却的无水乙醇，玻棒轻搅 乳白色DNA细丝 3、去除滤液中的杂质，获取DNA的粗提取物 （DNA的纯化） 去除滤液中的杂质小结（方案一） 染色质滤液 2mol/LNaCl溶液 玻璃棒一个方向搅拌 DNA溶解，染色质中的DNA与蛋白质分离 多层纱布过滤 纱布上DNA的黏稠物 DNA溶液 析出DNA黏稠物： 慢加足量蒸馏水：NaCl溶液浓度由_____变_____ 玻璃棒一个方向轻搅拌 DNA析出白色丝状黏稠物，蛋白质溶解 滤取DNA黏稠物： DNA黏稠物再溶解： 2mol/LNaCl溶液 过滤含DNA的NaCl滤液 DNA溶解、蛋白质沉淀 二层纱布过滤 提取含杂质 ... ...
