人教版选修一高中生物5.1《DNA的粗提取与鉴定》PPT(22张PPT)

(课件网) 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 提取生物大分子的基本思路是什么？ DNA主要与哪些生物大分子分离？ 方法1：根据DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，提取DNA 1、DNA在0.14 mol／L NaCl溶液中溶解度最低而此时蛋白质的溶解度最高，DNA形成沉淀析出。 2、DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精，将DNA与蛋白质进一步分离。 3、蛋白酶水解蛋白质，对DNA没有影响。 4、大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，DNA在80°C以上才会变性（蛋白质变性后溶解度降低而产生沉淀） 5、洗涤剂瓦解细胞膜（脂质），对DNA没有影响（在植物材料中提取DNA使用） 小结：粗提取DNA的方法 DNA溶解性 DNA耐受性 （二）鉴定提取物———DNA的方法： 1、DNA遇二苯胺（沸水浴）呈蓝色 2、甲基绿与DNA结合，呈绿色 自主学习（实验思路） （一）DNA从哪提取？（用什么方法破碎细胞而DNA不受破坏） （二）怎样将DNA与细胞中其他生物大分子分离？ （三）怎样鉴定我们提取的DNA？ 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 1、实验材料的选取 材料：新鲜的鸡血 原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。（人血红细胞？） 原因：①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得 ②鸡血细胞极易吸水胀破 （一）DNA从哪提取 从鸡血中获取鸡血细胞 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液 （1）破碎动物细胞的方法——— （2）破碎植物细胞的方法——— 渗透吸水胀破 洗涤剂+食盐搅拌研磨 ？ ？ 不充分？ 洗涤剂———离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐———NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 研磨不充分———使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少 （一）DNA从哪提取 破碎细胞，获取含DNA的滤液 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？ 可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 阅读课本55页的三个方案 （二）怎样将DNA与细胞中其他生物大分子分离 方案一：调节NaCl的浓度，反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质。 　　原理：高浓度的盐溶液除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，除去低盐溶液中的杂质。因此，反复溶解与析出DNA，就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 去除滤液中的杂质，获取DNA的粗提取物 去除滤液中的杂质，获取DNA的粗提取物 方案二：直接在滤液中加入嫰肉粉（图5-3），反应10～15min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质 方案三：将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15min，注意严格控制温度范围 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案二利用了酶的专一性； 方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。方案三利用了DNA的稳定性。 白色丝状物 2mol/L NaCl + 4ml二苯胺 实验组： 水浴加热 蓝色 等量2mol/L NaCl + 4ml二苯胺 水浴加热 对照组： 无蓝色 （三）怎样鉴定我们提取的DNA？ 2 2 答：整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌” 讨论： 两次蒸馏水 第一次：细胞吸水胀破 第二次：使 DNA黏稠物析出 （1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？ 三次过滤 第一次： DNA存在于滤液里 第二次： DNA被留在纱布上 第三次： DNA存在于滤液里 两次析出 第一次：用0.14 mol／L 的NaCI溶 第二次：用冷却的95％的酒精 六次搅拌 朝一个方向搅拌，搅动轻缓 1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（ ） A .防止凝血 B. 加快DNA析出 C .加快DNA溶解 D.加速凝血 2、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度 ... ...