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课件网) 专题2 :微生物的培养与应用 一、培养基作用、种类 二、无菌技术 三、制备牛肉膏蛋白胨培养基 四、纯化大肠杆菌 主要内容 课题1 微生物的实验室培养 微生物的实验室培养条件： （1）为培养的微生物提供合 适的营养和环境条件 （2）确保其他微生物无法混入 研究和应用微生物的前提 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物 一、培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基 一般的培养基均需要 碳源、氮源、无机盐和水等（含C、N的有机物既是异养型微生物的碳源也是氮源） 培养基还需要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 培养基的基本成分 〖思考〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。 牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 分析营养构成？各成分主要提供何种营养成分 液体培养基：用于工业生产 固体培养基：（一般用试管或培养皿盛装，在液体培养基的基础上再添加凝固剂琼脂。）用于菌种分离、鉴定菌落 培养基的种类 1、按物理状态分： 2、按功能分： 选择培养基：加入某种化学物质，从众多微生物中分离出所需微生物 鉴别培养基：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物 加入青霉素的培养基: 不加氮源的无氮培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离金黄色葡萄球菌 几种选择培养基举例： 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离固氮菌 分离自养型微生物 加入唯一碳源为纤维素的培养基 分解纤维素的细菌 加入高浓度食盐的培养基: 二、无菌技术 无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。 消毒 （一）、无菌技术的种类 灭菌 使用较为温和的物理和化学方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子。 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒； 将培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌； 接种的过程要在酒精灯火焰附近进行。 避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触 使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。 （1）、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min （2）、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min9(牛奶） （3）、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源（酒精擦拭双手 （4）、紫外线消毒（工作台、接种室）(能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构） …… 1、消毒的方法 （二）、常用的消毒与灭菌的方法 （1）、灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。试管口或瓶口等容易被污染的部位 2、灭菌的方法 （2）、干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～170OC中加热1～2h即可。 （3）、高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压蒸汽灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121OC后，维持15～30min即可。 3、消毒与灭菌的区别 条件 结果 常用的方法 消毒 灭菌 较为温和的物理或化学方法 强烈的理化因素 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，不包括芽孢和孢子 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 〖思考〗对接种环灭菌时要用酒精灯的 充分燃烧 层火焰灼烧 ... ...
