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课件网) 二 微生物的选择培养和计数 学习目标 1.理解选择培养基的概念和设计原理。 2.学习利用稀释涂布平板法进行微生物的选择培养。 3.利用实验探究土壤中分解尿素的细菌的分离与计数。 一、选择培养基 1.自然界中目的菌的筛选 (1)实例:聚合酶链式反应(PCR)中用到的耐高温的DNA聚合酶,就是从热泉中筛选出来的水生栖热菌中提取出来的。 (2)依据:水生栖热菌能在70~80 ℃的高温条件下生存,而绝大多数微生物在此条件下不能生存。? 2.实验室中目的菌的筛选 (1)原理:人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等),同时抑制或阻止其他微生物的生长。 (2)方法:利用选择培养基分离。 ①选择培养基:允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 ②实例:选择分解尿素的细菌的培养基,以尿素作为唯一氮源,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,在培养基上生长。 二、微生物的选择培养 1.取样 铲取土样,将样品装入纸袋中。 2.稀释涂布平板法 (1)系列稀释操作 将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀。取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中,依次等比稀释。 (2)涂布平板操作 3.培养与观察 待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37 ℃的恒温培养箱中培养1~2 d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 预习反馈 1.判断正误。 (1)选择培养基筛选出的微生物只有一种。( × ) (2)土壤样品稀释时不同的微生物应该选择不同的稀释度。( √ ) (3)选择培养基上的菌落数目明显少于牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目,说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落。( √ ) 2.在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称作( ) A.鉴别培养基 B.加富培养基 C.选择培养基 D.基础培养基 答案C 3.用来判断选择培养基是否起到了选择作用,需要设置的对照是( ) A.未接种的选择培养基 B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C.相同条件下接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D.相同条件下接种了的选择培养基 答案C 解析 将菌液稀释相同的倍数并接种,相同培养条件下牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目应明显多于选择培养基上的菌落数目,因此,应选择接种了的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照实验遵循单一变量原则,所以牛肉膏蛋白胨培养基要与选择培养基在相同条件下接种、培养。 三、微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法 (1)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (2)计数原则:一般选择菌落数为30~300的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。在同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值。 (3)注意事项:统计的菌落数往往比活菌的实际数目少,这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此,统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 2.显微镜直接计数法 一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下观察、计数,然后再计算一定体积的样品中微生物的数量,统计的结果一般是 活菌数和死菌数的总和。 四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.土壤取样 从酸碱度接近中性的潮湿土壤取样。先铲去表层土,在距地表约3~8 cm的土壤层取样。 2.样品的稀释 (1)选用一定稀释范围的样品液进行培养,保证获得菌落数为30~300的平板进行计数。 (2)第一次做实验时,可以将稀释度的范围放宽一点。 3.微生物的培养与观察 (1)培养:不同种类的微生物,往往需要不同 ... ...
