基因工程的原理和技术 第一步：获取目的基因 目的基因序列已知： 目的基因序列未知： 构建基因文库 化学合成法；PCR法 基因工程的工具———载体 作用：利于目的基因稳定存在于受体细胞中。 常见类型：质粒、病毒 质 粒 来源：细菌等 化学本质：双链DNA 形状： 位置： 数目： 所含基因： 拟核区之外 每个细菌中可有多个（可自主复制） 抗生素抗性基因等 小型环状 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。 EcoRI限制酶 酶 酶 基因工程的工具———限制性核酸内切酶(限制酶) 如何才能实现这种连接呢？ 第二步：构建重组DNA 动手模拟重组过程 1.用剪刀将目的基因剪下 2.用剪刀将质粒剪开 3.小组讨论：两种溶液混合后加入DNA连接酶，可能得到几种不同的DNA分子，然后利用胶带分工完成 限制酶识别位点 单个质粒环化 两个目的基因连接 两个质粒环化 目的基因与质粒 多个片段连接 可能连接方式 第三步：将重组DNA导入受体细胞 导入方法 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 农杆菌转化法 显微注射法 感受态细胞法 （用Cacl2处理） 受体细胞 切 切 农杆菌转化法 显微注射法 第四步：筛选含目的基因的受体细胞 如何筛选？ 为何筛选？ 利用运载体上的标记基因 四环素抗性基因 目的基因 请在下表中对导入了三种重组质 粒（插入点分别为a、b、c）的细菌 在培养基上的生长情况/插入点进行 合理推测： {7DF18680-E054-41AD-8BC1-D1AEF772440D}插入位点 细菌在含氨苄青霉素培养基上的生长状况 细菌在含四环素培养基上的生长状况 能生长 能生长 b 不能生长 能生长 C 能生长 不能生长 a 如何知道目的基因是否表达？ 第五步：目的基因的表达 ①是否产生特定的产物； ②特定性状的产生与否。 有关基因工程中的伦理道德探讨 正方： 反方： 谢谢
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