第2节 微生物的培养技术及应用 一 微生物的基本培养技术 必备知识·素养奠基 一、培养基的配制 1.培养基的概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质———培养基,用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。 2.培养基的分类:按照物理性质不同分为两类。 (1)液体培养基:呈液体状态的培养基,不加入凝固剂(如琼脂)。 (2)固体培养基:呈固体状态的培养基,加入凝固剂(如琼脂)。 3.营养组成:各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。 4.培养基特殊需求: (1)培养乳酸杆菌时,在培养基中添加维生素。 (2)培养霉菌时,将培养基调至酸性。 (3)培养细菌时,将培养基调至中性或弱碱性。 (4)培养厌氧微生物时,需要提供无氧的条件。 有同学认为液体培养基含有水,而固体培养基是没有水的,这种想法对吗?为什么? 提示:不对。液体培养基和固体培养基都含有水分,它们的区别为是否添加凝固剂。 二、无菌技术 1.无菌技术关键:防止杂菌污染。 2.消毒与灭菌: (1)概念: ①消毒:使用较为温和的物理、化学或生物等方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。 ②灭菌:使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。 (2)类型与方法: 连一连:将无菌技术类型、常用方法和适用对象用线连起来。 在无菌技术中,为什么许多实验操作都要在酒精灯火焰附近进行? 提示:酒精灯火焰周围温度高,细菌少,甚至无菌,这样可以避免周围环境中微生物的污染。 三、微生物的纯培养 1.微生物纯培养的概念:由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物,获得纯培养物的过程就是纯培养。 2.酵母菌的纯培养: (1)纯培养的原理:设法在培养基上得到由单个微生物繁殖形成的纯培养物(单菌落)。 (2)纯培养方法:平板划线法和稀释涂布平板法。 (3)纯培养过程: ①制备培养基:配制培养基→灭菌→倒平板 ②接种和分离酵母菌:用平板划线法在马铃薯培养基表面接种酵母菌。下列接种过程正确的顺序是baefcgd ③培养酵母菌:待菌液被培养基吸收,将接种后的平板和一个未接种的平板倒置,放入28 ℃左右恒温箱中培养24～48h。 (4)结果分析与评价: 结合酵母菌纯培养的过程,判断下列分析的正误: ①未接种的平板上没有菌种,此实验没有必要培养。 (×) 提示:培养未接种的平板起到对照作用,可以检验培养基的制备是否合格。 ②在未接种的培养基表面长出了菌落,说明培养基制备不合格。 (√) ③若无菌操作合格,在接种酵母菌的培养基上应观察到不同形态、不同颜色的酵母菌菌落。 (×) 提示:应该是观察到形态、颜色一致的酵母菌单菌落。 ④如果将酵母菌放置在35 ℃恒温箱中培养,相同时间后观察,菌落会比28 ℃ 条件下的大,数量多。 (×) 提示:酵母菌适宜生长温度为28 ℃,35 ℃条件下由于温度较高,酵母菌生长慢。 ⑤某同学使用平板划线法纯化酵母菌,培养48 h后,只在培养基的第一划线区域长出密集的菌落,其他区域未长出菌落,可能是这位同学第二次灼烧接种环未冷却就直接划线导致的。 (√) 将接种后的平板放在恒温培养箱中培养有必要吗?为什么? 提示:有必要。恒温培养箱可以提供微生物生长的适宜温度。 关键能力·素养形成 知识点一 培养基的配制 1.培养基的成分及功能: 营养要素 来 源 功 能 碳源(提供碳元素的物质) 无机碳源 NaHCO3等含碳无机物 ①构成细胞物质和一些代谢产物;②有机碳既是碳源又是能源 有机碳源 糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等 氮源(提供氮元素的物质) 无机氮源 铵盐、硝酸盐等 将无机氮合成含氮的代谢产物 有机氮源 牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 生长因子(生长必不可少的微量有机物) 维生素、氨基酸、碱基 ①酶和核 ... ...
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