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课件网) 专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养 一、培养基 必备知识·自主学习 二、无菌技术 1.关键:防止_____的入侵。 2.无菌技术的具体操作: 外来杂菌 3.消毒和灭菌: 消 毒 灭 菌 概念 使用较为_____的物理或化 学方法杀死物体_____或 内部的部分微生物(不包 括_____) 使用_____的理化因素杀死物体内外 _____的微生物(包括_____) 常用 方法 _____消毒法、巴氏消毒 法、_____消毒法、 紫外线消毒法 _____灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭 菌 适用 对象 操作空间、双手等 接种环、接种针、玻璃器皿、培养 基等 温和 表面 芽孢和孢子 强烈 所有 芽孢和孢子 煮沸 化学药剂 灼烧 三、大肠杆菌的纯化培养 1.制备培养基: (1)最常用的细菌培养基:_____。 牛肉膏蛋白胨固体培养基 (2)配制步骤: 2.纯化培养大肠杆菌以及菌种的保藏: (1)纯化培养的原理:设法在培养基上得到由_____繁殖而来的肉眼可见的 _____。 (2)纯化培养方法:最常用的方法有_____和_____。 (3)平板划线法:通过_____在琼脂固体培养基表面_____的操作,将聚集 的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 具体操作是:灼烧接种环→_____→第一次平板划线操作→_____ →培养大肠杆菌。 一个细胞 菌落 平板划线法 稀释涂布平板法 接种环 连续划线 沾取菌液 连续划线操作 (4)稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的_____,然后将不同稀释度的菌 液分别_____到琼脂固体培养基的表面,进行培养。 操作步骤是: ①系列稀释(梯度稀释)操作: 梯度稀释 涂布 ②涂布平板操作: a.取菌液:取少量菌液(不超过0.1 mL),滴加到_____表面。 b.涂布器灭菌:将沾有少量酒精的涂布器在_____,待酒精燃尽后,冷却8 ～10 s。 c.涂布过程:用_____将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养 皿,使菌液分布均匀。 培养基 火焰上引燃 涂布器 (5)菌种的保藏。 临时保藏法 甘油管藏法 适用对象 频繁使用的菌种 长期保存的菌种 培养基 类型 固体斜面培养基 液体培养基 温度 4 ℃ -20 ℃ 方法 菌落长成后放入冰箱中保藏,以 后每3～6个月将菌种从旧的培养 基上转移到新鲜的培养基上 将培养的菌液与等体积 灭菌后的甘油混合均匀 后放在冷冻箱中保存 缺点 菌种容易被_____或_____ 污染 产生变异 【易错辨析】 1.液体培养基含有水,而固体培养基不含水。 ( ) 分析:液体培养基与固体培养基都含有水,它们的区别为是否添加凝固剂。 2.纯化大肠杆菌可选用牛肉膏蛋白胨培养基。 ( ) 3.培养基分装到培养皿后进行灭菌。 ( ) 分析:培养基分装到培养皿前进行灭菌。 × √ × 4.平板冷凝后应将平板倒置,可以避免水分过度蒸发,也可防止皿盖上的冷凝水 落入培养基,造成污染。 ( ) 5.转换划线角度后需要灼烧接种环再进行划线。 ( ) 分析:从前一区域划线的末端开始往后一区域内划线之前,需要灼烧接种环。 √ √ 关键能力·合作学习 一、制备培养基 1.配制原则: (1)目的要明确:不同微生物需求不同,根据培养目的进行配制。 (2)营养要协调:营养物质的浓度和比例要适宜。 (3)pH要适宜:为维持pH的相对恒定,可在培养基中加入缓冲剂,常用K2HPO4或KH2PO4。 2.培养基的成分及功能: 营养要素 来 源 功 能 碳源 无机 碳源 CO2、NaHCO3等含碳无机物 ①构成细胞成分和一些代谢产物; ②有机碳既是碳源又是能源 有机 碳源 糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油等 氮源 无机 氮源 N2、NH3、铵盐、硝酸盐等 将无机氮合成含氮代谢产物 有机 氮源 牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等 合成蛋白质、核酸及含氮代谢产物 营养要素 来 源 功 能 生长因子 维生素、氨基酸、碱基 ①酶和核酸的组成成分; ②参与代谢过程中的酶促反应 水 外界摄入 ①良好溶剂 ②维持生物大分子结构的稳定 无机盐 ... ...
