(
课件网) 专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识 1.提取DNA 的方法和原理: (1)提取生物大分子的基本思路:选用一定的物理或化学方法分离具有_____ _____的生物大分子。 (2)提取DNA的方法:利用DNA与RNA、_____和脂质等在物理和化学性质方面的 差异,提取DNA,去除其他成分。 必备知识·自主学习 不同物 理或化学性质 蛋白质 2.DNA的溶解性: (1)DNA在NaCl溶液中的溶解度: 据图分析可知,DNA在不同浓度的NaCl溶液 中的溶解度不同,其中在_____NaCl 溶液中溶解度最低。? (2)DNA在酒精溶液中的溶解性:DNA_____酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质 _____酒精溶液。 0.14 mol/L 不溶于 溶于 3.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性: (1)对酶的耐受性:蛋白酶能水解_____,但对DNA没有影响。 (2)对温度的耐受性:大多数蛋白质不能忍受_____的高温,而DNA在_____ 以上才会变性。? (3)对洗涤剂的耐受性:洗涤剂能够瓦解_____,但对DNA没有影响。 4.DNA的鉴定:在_____的条件下,DNA与_____反应呈现蓝色。 蛋白质 60～80 ℃ 80 ℃ 细胞膜 沸水浴 二苯胺 二、实验设计 1.实验材料的选取:选用DNA含量_____的生物组织。 2.破碎细胞,获取含DNA的滤液: (1)动物细胞的破碎。 ①选材及方法:选用动物细胞作为实验材料时,由于其无_____,因此可直接采 用吸水涨破的方法。 ②过程:以鸡血为例。 在鸡血细胞液中加入一定量的_____,同时用_____搅拌,细胞会吸水涨破,然 后用纱布过滤,过滤后收集滤液即可。 相对较高 细胞壁 蒸馏水 玻璃棒 (2)植物细胞的破碎。 ①方法:需要先用_____溶解细胞膜。 ②过程:以提取洋葱的DNA为例。 在切碎的洋葱中加入一定的_____,进行充分地搅拌和_____,过滤后收 集研磨液。 洗涤剂 洗涤剂和食盐 研磨 3.去除滤液中的杂质: 方案一 利用DNA 在不同浓度的NaCl溶液中_____不同,通过控制 NaCl溶液的_____去除杂质 方案二 直接在滤液中加入_____,反应10～15 min,嫩肉粉中的 _____能够分解蛋白质 方案三 将滤液放在_____的恒温水浴箱中保温10～15 min, 注意严格控制温度范围 溶解度 浓度 嫩肉粉 木瓜蛋白酶 60～75 ℃ 4.DNA的析出:利用DNA不溶于_____这一原理,可从DNA溶液中析出比 较纯净的DNA,此时DNA的形态为_____。 5.DNA的鉴定:将析出的DNA溶解于5 mL物质的量浓度为_____中, 再加入4 mL的_____试剂,沸水浴加热5 min,冷却后观察溶液的颜色,同时设 计不含DNA的NaCl溶液作为对照。? 冷却的酒精溶液 白色丝状物 2 mol/L 的NaCl溶液 二苯胺 三、操作提示 1.以血液为实验材料时,每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠,目的是_____ _____。 2.加入洗涤剂后,动作要轻缓、柔和,否则容易产生_____,不利于后续步 骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧_____, 导致DNA 分子不能形成絮状沉淀。 3.鉴定DNA 用的二苯胺试剂要_____,否则会影响鉴定的效果。 防止血 液凝固 大量的泡沫 DNA分子的断裂 现配现用 【易错辨析】 1.DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,但它们都能溶 于酒精溶液。 ( ) 分析:DNA不溶于酒精溶液,而某些蛋白质等杂质可以溶于酒精溶液。 2.制备鸡血细胞液的过程中,加入柠檬酸钠的目的是加快DNA析出。( ) 分析:柠檬酸钠是抗凝血物质,可防止凝血,有利于鸡血细胞液的制备。 3.蛋白酶只能水解蛋白质,不能水解DNA。 ( ) 4.在用95%的冷酒精析出DNA时,应用玻璃棒沿同一个方向轻轻搅拌。 ( ) × × √ √ 5.在实验中两次加入蒸馏水,均是为了析出DNA。 ( ) 分析:两次加蒸馏水,第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质(DNA),第二次 是为了降低NaCl溶液的浓度使DNA析出。 6.在析出DNA时,要缓缓加入蒸馏水,直到出现絮状物为止。 ( ) 分析 ... ...
