高二生物人教版（2019）选择性必修33.1.2DNA的粗提取和鉴定课件（22张ppt）

3.1.2 DNA的粗提取与鉴定 探究-实践 DNA的粗提取与鉴定 （一）基础知识 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质上的差异，提取DNA，去除其他成分。 2、提取DNA分子的基本思路是什么？ 1、提取大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理、化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 1、DNA不溶于酒精溶液 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可初步分离DNA与蛋白质。 （二）DNA粗提取的原理 2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 --DNA的溶解性和耐受性 ① 观察右图，尝试描述DNA在NaCl 溶液中的溶解度曲线。 ② 如何通过控制NaCl溶液的浓度使 DNA在盐溶液中溶解或析出？ 任务： 资料：当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 〖思考② 〗 如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 先用2mol/L NaCl溶液溶解DNA，再加入蒸馏水，使其溶液浓度从2mol/L下降到0.14 mol/L，使DNA在盐溶液中析出。 ① 描述DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线。 将DNA和蛋白质进一步分离 酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。 问：采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？ 〖思考〗 3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶—水解蛋白质，对DNA没有影响。 ②高温—大多数 在60～80℃时变性沉淀,而 在 80℃以上才会变性。 ③洗涤剂—溶解细胞膜， 去除 ; 但对DNA没有影响。 蛋白质 DNA 脂质、蛋白质 4、DNA的鉴定 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此用二苯胺试剂鉴定DNA分子。 DNA + 二苯胺 沸水浴 蓝色 （三）目的要求 1、了解DNA的物理化学性质；理解DNA粗提取 和鉴定的原理 2、学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂 对DNA 进行鉴定 （四）材料用具 不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为如下提供的材料中哪些不适合提取DNA？为什么？ 供选材料：（括号内为染色体条数） 新鲜洋葱（16）、香蕉、菠菜（12）、菜花、、猕猴桃（58）； 猪肝（38）、鱼卵、鸡血（78）、哺乳动物的成熟红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌（1） 原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑 选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。 1、实验材料的选取 2、实验用具 烧杯、量筒、玻璃棒、 研钵、纱布、漏斗、 试管、试管架、试管夹、 酒精灯、石棉网、三脚架、火柴、 刀片和天平等。 （五）方法步骤： 1、实验材料的选取 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液 3、除去滤液中的杂质(纯化) 4、DNA的析出与鉴定 以洋葱为实验材料的实验设计： 1.称取约30g洋葱, 切碎，然后放入研钵中，倒入10ml研磨液，充分研磨。 2.在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在40C冰箱中放置几分钟 后，再取上清液。也可以直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500r/min 的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。 3.在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为95%），静止 2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方 向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；或者将溶液倒入塑料离 心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物 （粗提取的DNA ）晾干。 4.取两只20ml的试管，各加入2mol/lNaCl溶液5ml。将丝状物或沉淀物溶于其 中一个试管的NaCl溶液中，然后，向两只试管中各加入4ml的二苯胺试剂， 混合均匀后，将试管置于沸水中加热5m ... ...