中小学教育资源及组卷应用平台 高考真题 1.（2020·全国Ⅰ）(15分)[生物———选修1：生物技术实践] 某种物质S（一种含有C、H、N 有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。 回答下列问题： （1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_____的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_____。甲、乙培养基均属于_____培养基。 （2）实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107 个/mL，若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_____倍。 （3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是_____（答出1点即可）。 （4）若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤_____。 （5）上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即_____。 【答案】 （1）高压蒸汽灭菌；琼脂；选择 （2）104 （3）S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长 （4）取淤泥加入无菌水，涂布（或稀释涂布）到乙培养基上，培养后计数 （5）水、碳源、氮源和无机盐 【考点】微生物的分离和培养，测定某种微生物的数量，培养基对微生物的选择作用，培养基概述及其分类，灭菌技术 【解析】 （1）常用高压蒸汽灭菌法处理盛有水或培养基的摇瓶，乙为固体培养基，故需要加入Y琼脂；甲和乙培养基可以用于筛选能降解S的菌株，故均属于选择培养基。 （2）若要在每个平板上涂布100μL稀释液后的菌液，且每个平板上长出的菌落数不超过200个，则摇瓶M中的菌液稀释的倍数至少为2×107÷1000×100÷200=1×104倍。 （3）当培养基中的S超过某一浓度后，可能会抑制菌株的生长，从而造成其对S的降解量下降。 （4）要测定淤泥中能降解S的细菌的细胞数，可以取淤泥加无菌水制成菌悬液，稀释涂布到乙培养基上，培养后进行计数。 （5）甲和乙培养基均含有水、无机盐、碳源、氮源。 【分析】分析题图：①为淤泥取样进行稀释；②为接种到液体培养基上；③为稀释涂布平板法接种到以S为唯一碳源和氮源的选择培养基上，其中Y为琼脂；④为挑取单菌落接种到⑤已S为唯一碳源和氮源的选择及上进一步筛选。 每克样品中的菌落数 =（C/V）× M ；其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数。 该题目中：每克样品中的菌落数 ：2×107?个/mL、C：200、V：100μL，求M的值。 2.（2020·全国Ⅱ）(15分)[生物———选修1：生物技术实践] 研究人员从海底微生物中分离到一种在低温下有催化活性的α-淀粉酶A3 ， 并对其进行了研究。回答下列问题： （1）在以淀粉为底物测定A3酶活性时，既可检测淀粉的减少，检测应采用的试剂是_____，也可采用斐林试剂检测_____的增加。 （2）在A3的分离过程中可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度，通常会在凝胶中添加SDS，SDS的作用是_____和_____。 （3）本实验中，研究人员在确定A3的最适pH时使用了三种组分不同的缓冲系统，结果如图所示。某同学据图判断，缓冲系统的组分对酶活性有影响，其判断依据是_____。 在制备A3的固定化酶时，一般不宜采用包埋法，原因是_____ （答出1 点即可）。 【答案】 （1）碘液；还原糖（或答：葡萄糖） （2）消除蛋白质所带净电荷对迁移率的影响；使蛋白质发生变性 （3）在pH相同时，不同缓冲系统条件下所测得的相对酶活性不同 （4）酶分子体积小，容易从包埋材料中漏出 【考点】探究影响酶活性的因素，蛋白质的提取 ... ...
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