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课件网) 选修3疑难点探讨 一、易混概念 第一部分：基因工程 基因探针 基因诊断 基因敲除 【基因探针】：即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件： ①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。 一、易混概念 第一部分：基因工程 基因探针 基因诊断 基因敲除 【基因诊断】：又称DNA诊断或分子诊断，通过分子生物学和分子遗传学的技术，直接检测出分子结构水平和表达水平是否异常，从而对疾病做出判断。进行基因检测有两个必要条件，一是必需的特异的DNA探针；二是必需的基因组DNA。 一、易混概念 第一部分：基因工程 基因探针 基因诊断 基因敲除 【基因敲除】：是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。 一、易混概念 第一部分：基因工程 基因探针 基因诊断 基因敲除 【DNA分子杂交技术】：互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 DNA分子杂交技术 抗原-抗体杂交技术 一、易混概念 第一部分：基因工程 基因探针 基因诊断 基因敲除 【抗原-抗体杂交技术】：Western杂交———蛋白质分子（抗原—抗体）之间的杂交。它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法。 DNA分子杂交技术 抗原-抗体杂交技术 具体做法是： 第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质； 第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）； 第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳； 第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上； 第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。 由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。 二、疑难问题 第一部分：基因工程 限制性核酸内切酶能识别RNA序列吗？ 限制性核酸内切酶是能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶。P2 二、疑难问题 第一部分：基因工程 不同限制酶处理获得的不同黏性末端也可形成重组DNA分子吗？ 限制酶产生的末端的连接有三种情况： ①匹配末端。用同一种酶酶切产生的带相同突出端的两个片段；用不同的酶酶切但带有相同突出端的两个片段，如用BamHⅠ及BglⅡ酶切相同的突出端都可以匹配，并在连接酶作用下连接。 ②平末端。平末端可以直接连接，但连接效率比黏性末端低。 ③不匹配黏端。不配对黏端的连接可采用两种方法：A.用S1酶切除突出的核苷酸，将黏端修平，再用连接酶连接。B.用Klenow酶将黏端部分补平，如HindⅢ与XbaⅠ产生的黏端不能匹配，可分别用两种核苷酸填补，使之产生匹配黏端，再用连接酶连接，该法的优点在于可防止片段的自身连接。 5’-A 3’-TTCGA CTAGA-3’ T-5’ 5’-AAG CTAGA-3’ TCT-5’ 3’-TTCGA 5’-AAGCTAGA-3’ 3’-TTCGATCT-5’ Klenow酶 Klenow酶 dATP dGTP dTTP dCTP 二、疑难问题 第一部分：基因工程 Ti质粒是什么？P9 农杆菌转化法 Ti质粒是在根瘤土壤农杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链DNA分子。它控制根瘤的形成，可作为基因工程的载体。此质粒既有在细菌中表达的基因，又有 ... ...
