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课件网) 吸光光度法 一 概述 吸光光度法: 基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。 分类：根据物质所吸收光的波长范围不同，分为紫外、可见及红外分光光度法。 基本方法： 有色物质浓度 ~ 颜色深浅 ~ 吸收光程度 通过比较颜色深浅（吸收光程度），测定物质的浓度。 方法的评价 适用面广 快速、简便 分析有色、无色、浅色物 溶液状态、均质固态样品 灵敏度高：浓度下限达10-5~10-6 mol·L-1 准确度高：相对误差通常为2~5％ 一 概述 用于化学平衡等的研究 适用于分析半微量和微量的物质 二 吸光光度法的基本原理 1. 可见光与颜色 阳光 棱镜 连续光谱 物质 不连续光谱 可见光区的划分 : 400 450 500 550 600 650 760 λ/nm 互补光的对应关系 光的互补：蓝 黄 二 吸光光度法的基本原理 光谱示意 表观现象示意 2. 物质对光的选择性吸收 二 吸光光度法的基本原理 物质的颜色与光的关系 复合光 完全吸收 完全透过 吸收黄色光 复合光 （3）同一物质c不同时吸收曲线不同, λmax 不变; （4） λmax有特征性，可作为定性依据。 （1）同一物质对不同波长光的吸收程度不同; （2）每种物质都有一个最大吸收波长(λmax); 信息： 物质对光的选择性吸收及吸收曲线 A c1 c2 λmax 二 吸光光度法的基本原理 三. 光吸收定律 Beer - Lambert定律 Lambert 定律 : λ, c, T一定 A∝ 光程距离 (b) A ∝ 物质的浓度c - dI ∝ I db - dI = k1 I db 吸光度 二 吸光光度法的基本原理 λ, b, T一定 Beer定律 : Beer - Lambert定律———光吸收定律 A———吸光度 Io ———入射光强度 a———吸光系数 I———透射光强度 b———光程距离 c———浓度 当一束平行单色光通过溶液时，溶液的吸光度A与溶液的c和b成正比。 A ∝ bc 当 b 一定时， A ∝ c， 可以定量 二 吸光光度法的基本原理 吸收光 ， A ， 物质浓度 。 注意 : （1） 物质不吸光， I=Io ， A=0 物质吸收部分光， I＜Io， A＞0 （2） A具有加和性，A总=A1+A2+…… +An （3）入射光的λ：可见光, 紫外光, 红外光 （4）光吸收定律的应用条件 稀溶液 入射光为单色光 二 . 吸光光度法的基本原理 （5）也可以用透射光强度（透射率T%）表示 T %的含义： 物质不吸收光 I=Io ， T% =100% 物质吸收部分光， I＜Io ，T%＜100% T% ，物质的浓度 。 二 . 吸光光度法的基本原理 （6） 吸光系数的二种表示形式 浓度为1g·L-1的溶液，在某波长时，用1cm的比色皿，所测得的吸光度 浓度为1mol·L-1的溶液，在某波长时，用1cm的比色皿，所测得的吸光度 吸光系数a 摩尔吸光系数 意义 单位 L/g·cm L/ mol ·cm A=abc A= bc 二 . 吸光光度法的基本原理 （1） 在数值上等于c=1 mol ·L-1、b=1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。是吸收物质在一定波长和溶剂下的特征常数。 （2）不随c和b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时， 仅与吸收物质本身的性质有关，故 可作为定性鉴定的参数。 摩尔吸收系数 的讨论 二 . 吸光光度法的基本原理 （3） 是物质的吸光能力的度量。同一吸收物质在不同波长下的 值不同。在λmax处的 max表明了吸收物质最大限度的吸光能力，反映了测定可能达到的最大灵敏度。 （4） max越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 >105：超高灵敏 = (6~10)×104：高灵敏 = 104~103：中等灵敏 < 103：不灵敏 二 . 吸光光度法的基本原理 例 ： 已知含[Fe2+]=500μg/L的溶液，当用邻二氮杂菲为显色剂测定铁时，用2cm比色皿，在波长508nm处测得吸光度A为0.19。请计算铁的摩尔吸光系数。 解： 二 . 吸光光度法的基本原理 4. 偏离Beer-Lambert定律的原因 出现的现象： A c 产生原因： 1） 单色光不纯 在高浓度端， 工作 ... ...
