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课件网) 第4单元 遗传的分子基础 第3课时 DNA的粗提取与鉴定 内容索引 核心体系 学习目标 活动方案 检测反馈 学 习 目 标 学习目标 1. 说出DNA的粗提取与鉴定的原理。2. 掌握DNA的粗提取与鉴定的方法。 核 心 体 系 活 动 方 案 鸡血细胞中DNA的粗提取与鉴定的大致实验步骤如下： 破碎鸡血细胞，释放DNA→溶解核DNA→析出含DNA的黏稠物→将DNA黏稠物再溶解→提取含杂质较少的DNA→DNA鉴定 请回答下面的问题。 (1) 该实验中为什么不能使用猪红细胞作为实验材料？获得鸡血后，在其中需加入柠檬酸钠，目的是什么？ 【答案】 哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，没有DNA。防止血液凝固。 活动一 说出DNA的粗提取与鉴定的原理和方法 (2) 该实验中是如何使红细胞破裂的？如果使用的是植物材料，则不能使用这种方法，为什么？提取植物细胞中的DNA时，可以采取什么方法使细胞破裂？提取DNA利用的是什么原理？ 【答案】 将鸡血细胞置于蒸馏水中，使细胞吸水涨破。植物细胞外有细胞壁，在蒸馏水中不会涨破。可以用洗涤剂溶解细胞膜。DNA可以溶于2 mol/L NaCl溶液。 (3) 实验中可以通过哪些方式去除杂质？ 【答案】 通过控制NaCl溶液的浓度反复溶解、过滤、析出；加入木瓜蛋白酶分解蛋白质；用60～70 ℃的恒温水浴箱保温，使蛋白质变性；用冷酒精析出DNA，同时除去溶解于酒精的杂质。 (4) 实验中两次加入蒸馏水的目的分别是什么？ 【答案】 第一次：使血细胞吸水涨破，释放出DNA；第二次：加到含DNA的物质的量浓度为2 mol/L 的NaCl溶液中稀释NaCl，使其物质的量浓度下降到0.14 mol/L，析出DNA。 (5) 实验中加入95%的冷酒精的目的是什么？ 【答案】 DNA不溶于95%的冷酒精，加入冷酒精是为了使DNA析出，同时除去一些能溶解于酒精的杂质。 (6) 鉴定DNA的原理是什么？ 【答案】 DNA与二苯胺沸水浴呈蓝色。 (7) 若用菜花(花椰菜)等植物细胞作为实验材料时，破碎细胞、释放DNA的操作方法是什么？ 【答案】 用加有食盐的洗涤剂，缓慢地研磨，使植物细胞破碎，释放出的DNA溶解在食盐溶液中。 CTAB法和SDS法是提取DNA的常用方法，CTAB提取液含有CTAB、EDTA等成分，SDS提取液含SDS、EDTA等成分。CTAB能破坏膜结构，使蛋白质变性，提高DNA在提取液中的溶解度；SDS能破坏膜结构，使蛋白质变性；EDTA能螯合Mg2＋、Mn2＋，抑制DNA酶的活性。某科研小组为了寻找提取蜡梅DNA的优良方法，比较了两种提取DNA的方法，主要操作如下图所示： 活动二 举例说明DNA的粗提取的运用 实验测定结果如下(表中OD260反映溶液中核酸的浓度，OD280反映溶液中蛋白质的浓度。理论上，纯DNA溶液的OD260/OD280为1.800，纯RNA溶液的OD260/OD280为2.000)。 CTAB SDS OD260 OD280 OD260/OD280 OD260 OD280 OD260/OD280 0.033 0.018 1.833 0.006 0.005 1.200 请回答下列问题。 (1) 与常温下研磨相比，液氮中研磨的优点是_____ _____，CTAB法和SDS法提取液中都加入EDTA的目的是_____。 (2) 氯仿-异戊醇密度均大于水且不溶于水,DNA不溶于氯仿-异戊醇,蛋白质等杂质可溶于氯仿-异戊醇，实验过程中加入氯仿-异戊醇离心后，应取①_____加异丙醇(异丙醇与水互溶)并离心进行纯化，利用异丙醇溶液纯化DNA的原理是_____。 研磨充分，低温抑制 酶活性，降低DNA的分解 减少DNA水解，提高DNA的完整性和总量 上清液 DNA不溶于异丙醇，而杂质能溶于异丙醇 (3) 两种方法中，_____法提取的DNA较多，其可能原因是_____。 (4) 两种方法中，_____法提取的DNA纯度较低，其含有的主要杂质是_____。 CTAB CTAB提高了DNA在提取液中的溶解度，从而能提取出更多的DNA SDS 蛋白质 检 测 反 馈 2 4 5 1 3 6 1 [学生用书P120]下图所示为“DNA的粗提 ... ...
