3.2 基因工程的基本操作程序（第三课时）课件（共18张PPT）-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

(课件网) 第3章 基因工程 第二节 基因工程的基本操作程序 （第三课时） 1.目的基因的筛选和获取-前提 利用PCR获取和扩增 人工合成 2.构建基因表达载体-核心 目的基因、启动子、终止子、标记基因 3.将目的基因导入受体细胞-关键 农杆菌转化法(植物)、显微注射法(动物) 、 感受态细胞转化法(微生物); 4.目的基因的检测与鉴定-保证 分子检测：是否插入、转录、翻译 个体水平：是否具有抗性以及抗性强度等 小结 基因工程的基本操作程序 检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 （二）个体生物学水平鉴定 方法： 抗虫或抗病接种实验 PCR等技术 ———�抗原—抗体杂交技术” PCR和核酸分子杂交技术可更加精准地鉴定受体细胞中是否转入了目的基因！ 方法1：PCR等技术 转基因生物 提取DNA 根据目的基因的序列设计PCR引物 PCR操作 是否扩增出目的基因 琼脂糖凝胶电泳 DNA测序技术 你知道PCR会扩增出哪些不同的片段吗？ 只含目的基因片段 目的基因在整个DNA片段的中央位置 复制3次后 这两个DNA分子量相同吗？ 种类1 种类2 种类3 种类4 种类5 怎么鉴定PCR的产物？ 电泳！ DNA片段的扩增及电泳鉴定 探究.实验 一、实验原理 （一）DNA体外扩增的原理： PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合，PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCR一般要经历30次循环。 （一）琼脂糖凝胶电泳的原理： DNA分子具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。 在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。 凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。 电泳： 在电场的作用下，DNA、RNA、蛋白质等这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。 正极 负极 电场力 DNA片段的扩增及电泳鉴定 探究.实验 二、实验材料 （一）仪器： PCR仪 微量离心管 电泳装置 微量移液器 自动控温，实现DNA的扩增 实际上是进行PCR反应的场所 用于向微量离心管转移PCR配方中的液体 包括电泳仪、电泳槽等 DNA片段的扩增及电泳鉴定 探究.实验 二、实验材料 （二）材料： ①4种脱氧核苷酸等量混合液、2种引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、扩增缓冲液、无菌水。 ③PCR反应体系的配方(见教材) ②电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、琼脂糖和核酸染料等。 三点提醒 在PCR过程中实际加入的为dNTP（即dATP、dGTP、dTTP、dCTP），既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。 引物既可以是DNA单链，也可以为RNA单链。细胞内的DNA进行复制时，也需要引物，一般为RNA片段；PCR引物一般为DNA片段。 真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。因此，PCR反应缓冲溶液中一般要添加Mg2＋。 1 2 3 DNA片段的扩增及电泳鉴定 探究.实验 三、实验步骤 移液：用微量移液器按照PCR反应体系配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。 离心：待所有组分都加入后，盖严离心管的盖子，将微量离心管放入离心机里，离心约10s，使反应液集中在离心管的底部（提高反应速率）。 扩增：参照下表的参数，设置好PCR仪的循环程序。将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应。 （一）PCR扩增： DNA片段的扩增及电泳鉴定 探究.实验 三、实验步骤 熔化：电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积比0.8%～1.2%的琼脂糖溶液。在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖熔化。稍冷却后，加入适量的核酸染料混匀。 倒模：将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具 ... ...