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课件网) 自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，更难实现。 那么我们又如何达成这一目标呢？ 阅读课本P16回答： 1、为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？ 2、栖热菌的筛选对我们筛选出特定微生物有何借鉴意义？ 二、微生物的选择培养和计数 （一）选择培养基 1．水生栖热菌的筛选：水生栖热菌能在70～80 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 2．选择培养基：在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 目的：从众多的微生物中分离所需要的微生物 选择培养基 方法 特点 举例 利用微生物的营养特点进行选择培养 通过控制培养基的营养成分，使某种微生物能生长，其他微生物不能生长 利用只含有尿素一种氮源的培养基，可筛选出分解尿素的细菌；加入高浓度的食盐可筛选出金黄色葡萄球菌 利用某种化学物质进行的选择培养 在完全培养基中加入某些化学物质，抑制某些微生物，同时选择所需的微生物 加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌 利用培养条件进行的选择培养 改变微生物的培养条件 在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物，不加含碳有机物可分离出自养型微生物，不添加氮源可分离固氮菌 三种筛选方法的特点及举例 思考-讨论 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。 讨论： 1、你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？ 2、该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素缺乏氮源而不能生长发育繁殖，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 该培养基只是用尿素作为唯一氮源。其他成分基本相同。 （二）微生物的选择培养 如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行稀释及科学的微生物数量测定方法--稀释涂布平板法。 2、实验的具体操作： 2）土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌 1）制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基 1、稀释涂布平板法 是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 1ml 107 3）样品梯度稀释： 微量 移液器 稀释10倍菌液 101 土壤10g 在火焰旁称取土壤10g，加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中，摇匀，制成稀释10倍的土壤菌液 分别取1ml上清液，加入盛有9ml无菌水的试管中，依次等比稀释，制成不同稀释倍数的菌液。 取6支试管，分别加入9ml无菌水。 移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成 取菌液：取0.1mL菌液滴加到培养基表面 涂布器消毒：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 涂布器灭菌：将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽后、涂布器冷却后，再进行涂布 涂布平板：用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使涂布均匀 4）涂布平板操作 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 放入37℃恒温箱中培养1～2d 5 ... ...
