(
课件网) 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 选择性必修三 第 2 章 第 2 节 动物 细胞工程 人细胞 小鼠细胞 杂交细胞 红色荧光标记 膜蛋白 染绿色荧标记 膜蛋白 荧光标记人鼠融合实验 1970年 细胞融合 37℃ 40℃ 将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 原理 细胞膜的流动性 动物细胞融合 动物细胞融合 物理法： 化学法： 生物法： 电融合法 聚乙二醇(PEG)融合法 灭活病毒诱导法 诱导方法 植物体细胞杂交的特有诱导方法： 高Ca2+ - 高pH融合法 动物细胞融合的特有诱导方法： 灭活病毒诱导法 A细胞 B细胞 诱导融合 【P48相关信息】病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活病毒诱导法 病毒黏附使细胞凝聚 膜打开 膜融合 细胞质融合 【P48相关信息】灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。 仙台病毒 紫外线 灭活 丧失感染活性(不感染细胞) 保留融合活性(诱导细胞融合) A细胞 B细胞 诱导融合 动物细胞融合 杂交细胞 核的融合时间： 细胞融合完成的标志: 细胞核融合成一个核 单核细胞 含两个或多个细胞的遗传物质 杂交细胞特点： 杂交细胞第一次有丝分裂时进行 正在融合的鸡血细胞 A细胞 B细胞 诱导融合 动物细胞融合 杂交细胞 生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌—鸡 原生质体—血红细胞 1975年 人—胡萝卜 腹水癌细胞—原生质体 1976年 人—小鼠 纤维肉瘤细胞———畸胎瘤细胞 1978年 正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 动物细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体 体液免疫 自学时间 P48-49 Q1：单克隆抗体的制备过程选择哪两种细胞进行融合？ Q2：单克隆抗体的制备过程细胞融合后有几种融合细胞？ Q2：如何筛选出所需要的融合细胞？ B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 注射特定抗原1 脾脏 B细胞自身融合细胞 骨髓瘤细胞自身融合细胞 诱导融合 杂交瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 B细胞自身融合细胞 骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 选择培养基 杂交瘤细胞 （既能迅速大量增殖，又能产生抗体） 注射抗原1 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞 融合 筛选2 B1-G B G B-B G-G B2-G Bn-G 筛选出杂交瘤细胞 B1-G B2-G B3-G 选择培养基 筛选1 B1-G 筛选出产生所需抗体杂交瘤细胞 多孔培养板 稀释 杂交瘤细胞 B1-G B2-G B3-G “多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞，“克隆化培养”每个杂交瘤细胞。 筛选二 抗体 检测板 多孔细胞培养板 克隆化培养：将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个进行培养 抗体检测 ：一段时间后，滴加相应抗原1，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体 多次克隆化培养和抗体检测进行筛选 阳性孔 B1-G B1-G 注射抗原1 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 选择培养基 筛选2 B1-G B G B-B G-G B2-G Bn-G 筛选出杂交瘤细胞 B1-G B2-G B3-G 筛选1 B1-G 筛选出产生所需抗体杂交瘤细胞 多次克隆化培养和抗体检测进行筛选 注射抗原1 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞 融合 选择培养基 筛选2 B1-G B G B-B G-G B2-G Bn-G 筛选出杂交瘤细胞 B1-G B2-G B3-G 筛选1 B1-G 筛选出产生所需抗体杂交瘤细胞 多次克隆化培养和抗体检测进行筛选 体外培养 体内培养：注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 注射抗原1 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞 融合 选择培养基 筛选2 B1-G B G B-B G-G B2-G Bn-G 筛选出杂交瘤细胞 B1-G B2-G B3-G 筛选1 B1-G 筛选出产生所需抗体杂交瘤细胞 多次克隆化培 ... ...
