第3章　第2节　第1课时　目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建（学案（含答案） 课件，2份打包）

(课件网) 第1课时 目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建 第3章 基因工程 <<< 学习目标 1.简述PCR的原理、条件及过程。 2.简述基因表达载体的组成及构建过程。 内容索引 一、目的基因的筛选与获取 二、基因表达载体的构建 课时对点练 目的基因的筛选与获取 一 1.培育转基因抗虫棉的四个步骤 (1)目的基因的 。 (2) 的构建。 (3)将目的基因导入 。 (4)目的基因的 。 筛选与获取 梳理　教材新知 基因表达载体 受体细胞 检测与鉴定 2.目的基因 (1)概念：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期 等的基因就是目的基因。 (2)作用：根据不同的需要，目的基因是不同的，它主要是指_____ 的基因。 (3)类型：与 、 、 和工业用酶等相关的基因，如培育转基因抗虫棉用到的 ，即Bt基因。 表达产物 编码蛋白质 生物抗逆性 生产药物 毒物降解 Bt抗虫蛋白基因 3.筛选合适的目的基因：从 的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。 4.获取目的基因的方法 (1)人工合成目的基因。 (2)常用 特异性地快速扩增目的基因。 (3)通过构建基因文库来获取目的基因。 相关的已知结构和功能清晰 PCR 5.利用PCR获取和扩增目的基因 (1)含义：PCR是 的缩写。它是一项在体外提供参与DNA复制的 与 ，对目的基因的 进行大量复制的技术。 (2)原理： 。 (3)基本条件 ①场所：在一定的 液中进行，其中一般要添加Mg2＋。 ②模板：DNA母链。 ③原料：4种 。 ④酶： 的DNA聚合酶。 ⑤引物：使DNA聚合酶能够从引物的 端开始连接脱氧核苷酸。 聚合酶链式反应 各种组分 反应条件 核苷酸序列 DNA半保留复制 缓冲 脱氧核苷酸 耐高温 3′ (4)过程 ①变性：当温度超过 ℃时，双链DNA 为单链。 ②复性：当温度下降到 ℃左右时， 通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 ③延伸：当温度上升到 ℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在_____ 的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 (5)上一轮循环的产物可以作为下一个循环的 ，因而每一次循环后目的基因的量可以 ，即成 形式扩增(约为2n，其中n为扩增循环的次数)。 (6)鉴定：常采用 来鉴定PCR的产物。 90 解聚 50 两种引物 72 耐高温 的DNA聚合酶 模板 增加一倍 指数 琼脂糖凝胶电泳 (1)PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应(　　) 提示　PCR反应中温度的周期性改变是为了变性、复性、延伸，DNA聚合酶催化子链的延伸。 (2)PCR扩增技术中，需用解旋酶使双链DNA解聚(　　) 提示　PCR扩增技术中，高温使双链DNA解聚。 (3)PCR过程使用的DNA聚合酶的特点是耐高温(　　) (4)PCR技术中，DNA模板链上碱基G和C的比例越高，DNA变性解链的温度就越高(　　) × × √ √ 任务一：PCR扩增技术 图1、图2分别是PCR扩增技术相关过程，请思考回答下列问题： 探究　核心知识 1.PCR扩增的 (填“是”或“不是”)完整的模板DNA分子，理由是 。 不是 PCR扩增的仅仅是两种引物之间所对应的特定DNA片段 2.图1所示利用PCR技术扩增目的基因，在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，这种DNA所占的比例是 。 3.如果已知某目的基因的序列和结构，利用PCR筛选和扩增出该目的基因的关键是_____ _____ 。 3 1/4 根据目 的基因两端的核苷酸序列设计 引物 4.图2是某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理，第1组不合理的原因是 。第2组不合理的原因是_____ 。 引物Ⅰ和引物Ⅱ会因局部发生碱基互补配对而失效 引物Ⅰ′自身折叠后会因出现局部碱基互补配对而 失效 5.要保证目的基因能与载体相连接，要在两种引物的 分别添加上 。 6.如果循环n次，则共需消耗 对引物。 5′端 限制酶的识别序列 2n－1 PCR中的数量关系 核心归纳 (1)引物 ... ...