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课件网) 主干知识排查 第3章 基因工程 <<< 一、重组DNA技术的基本工具 1.限制酶主要是从 生物中分离纯化出来的。 2.限制酶的作用：能够识别 ，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。 3.当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开时，产生的是 ；当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的是 。 知识梳理 原核 双链DNA分子的特定核苷酸序列 黏性末端 平末端 4.DNA连接酶主要有两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为E.coli DNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来的，称为T4 DNA连接酶。这两类酶都能将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的____ ，但E.coli DNA连接酶_____ 。 5.质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞 或原核细胞 之外，并具有 的环状双链DNA分子。天然质粒一般都要经过人工改造才能被用作载体。 6.在基因工程中使用的载体除质粒外，还有 、 等。 磷酸 二酯键 连接具有平末端的DNA片段的效率要远远 低于T4 DNA连接酶 细胞核 拟核DNA 自我复制能力 噬菌体 动植物病毒 二、基因工程的基本操作程序 1.目的基因主要是指 的基因，如与生物抗逆性、生产药物、毒物降解、工业用酶等相关的基因。 2.PCR是 的缩写。它是一项根据 的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的 进行大量复制的技术。 3.PCR反应需要在一定的 液中才能进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链结合的2种 ，4种 和 的DNA聚合酶。 编码蛋白质 聚合酶链式反应 DNA半保留复制 核苷酸序列 缓冲 引物 脱氧核苷酸 耐高温 4.PCR扩增过程中，每次循环一般可以分为变性、复性和延伸三步。 (1)变性：当温度超过 ℃时，双链DNA 为单链。(2)复性：当温度下降到 ℃左右时， 通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。(3)延伸：当温度上升到 ℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在_____ 的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。上一轮循环的产物可以作为下一个循环的 ，因而每一次循环后目的基因的量可以 ，即成 形式扩增。 90 解聚 50 两种引物 72 耐高温 的DNA聚合酶 模板 增加一倍 指数 5.常采用 来鉴定PCR的产物。 6.基因工程操作程序的核心步骤是 。 7.基因表达载体的组成：除目的基因外，它还必须有 、 、 、复制原点等。 8.基因表达载体的构建过程：首先会用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口；然后用 限制酶或 的限制酶切割含有目的基因的DNA片段；再利用 将目的基因片段拼接到载体的切口处。 琼脂糖凝胶电泳 基因表达载体的构建 启动子 终止子 标记基因 同种 能产生相同末端 DNA连接酶 9.将目的基因导入植物细胞常用的方法： 、 ；将目的基因导入动物细胞的方法： ；将目的基因导入微生物细胞的方法：用 处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。 10.对于植物来说，受体细胞可以是 或 ，因为_____ 。对于动物来说，受体细胞一般是 ，因为_____ 。 农杆菌转化法 花粉管通道法 显微注射技术 Ca2＋ 受精卵 体细胞 植物细胞具 有全能性 受精卵 受精卵的全 能性高，而高度分化的动物体细胞的全能性受到抑制 11.目的基因的检测与鉴定 (1)分子水平的检测 ①导入水平：通过 等技术检测受体细胞的 上是否插入了 。 ②转录水平：利用 等技术检测目的基因是否转录出了 。 ③翻译水平：用相应抗体进行 检测目的基因是否翻译成 。 (2)个体生物学水平的鉴定：抗虫、抗病接种实验等。 PCR 染色体DNA 目的基因 PCR mRNA 抗原—抗体杂交 蛋白质 三、基因工程的应用 1.植物基因工程技术主要用于提高农作物的 能力(如抗除草剂、抗虫、抗病、 和 等)，以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。 2.将 ... ...
