(
课件网) 第2章 细胞工程 第2节 动物细胞工程 希普：首例胚胎移植成功 哈里森：首创动物组织体外培养法 张明觉：哺乳动物精子获能现象 格登、童第周：体细胞核移植成功 试管家兔诞生 米尔斯坦和科勒：创立单克隆抗体技术 胚胎分割移植成功 埃文斯：成功分离和培养小鼠的胚胎干细胞 体细胞克隆羊多莉诞生 山中伸弥：获得诱导多能干细胞 单细胞基因组测序进行遗传病筛查的试管婴儿诞生 我国科学家首次培育了体细胞克隆猴 1890年 1907年 1951年 1958年 1959年 1975年 1978年 1981年 1996年 2006年 2014年 2017年 科技探索之路：动物细胞工程（含胚胎工程）的发展历程 动物细胞培养、动物细胞融合、动物细胞核移植等。 动物细胞工程常用的技术： 动物细胞工程的基础 小面积烧伤： ①使用他人皮肤如何？ 患者自身的不够用，如何解决？ ②培养自身细胞？ 从社会中来 自体皮肤移植 大面积烧伤？ 从社会中来 通过动物细胞培养构建的人造皮肤 原理： 操作原因： 对象：幼龄动物 or 老龄动物 动物体 组织 取出 单个细胞 分散 细胞生长和增殖 适宜的 培养条件 动物细胞培养： ①成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖（P44）； ②分散利于与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出。 细胞增殖 幼龄个体的细胞分化程度低、分裂能力强，易培养。 一、动物细胞培养的条件 动物体内的细胞之所以能够维持正常的生命活动，是因为机体给这些细胞提供了适宜的条件。你还记得有哪些条件吗？ 体外动物细胞培养需要满足什么条件？ 充足的营养 稳定的内环境 糖类、氨基酸、无机盐、维生素 …… 无菌、无毒的环境 适宜的温度、pH 和渗透压 适宜的气体环境 一、动物细胞培养的条件(P44) 1.营养 培养基的类型：固体培养基 or 液体培养基（培养液） 基本营养： 特殊物质： 含有尚未研究清楚的细胞所需的营养物质 将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基。 营养基构成： 水、无机盐、有机碳源、有机氮源 维生素、血清 血清 合成培养基 + 血清等一些天然成分 一、动物细胞培养的条件 2.无菌、无毒的环境 措施1: 灭菌处理———对象？ 措施2: 操作在无菌环境下进行。 措施3: 培养液中适量添加 。 措施4：定期更换培养液———目的？ 培养液和所有培养用具 抗生素 清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。 ———抑制细菌生长 一、动物细胞培养的条件 与相应动物内环境的理化性质保持一致。 ①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以_____为宜； ②适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为_____； ③适宜的渗透压：维持细胞正常的形态和功能。 36.5±0.5℃ 7.2-7.4 3.温度、pH和渗透压 ①气体的组成及作用 ②培养装置: 培养皿或松盖培养瓶 （含有95%空气和5%CO2的混合气体） 置于 维持培养液的pH 细胞代谢所必需 CO2培养箱中进行培养 一、动物细胞培养的条件 4.气体环境 95%空气（O2）： 5%CO2： 培养皿 培养瓶 CO2培养箱 二、动物细胞培养的过程（P44-45) ①培养前用什么方法分散成单个细胞？ ②体外培养动物细胞有哪些类型？ 什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？ ③什么是原代培养和传代培养？ 为什么要进行分瓶培养？怎么处理？ ④动物细胞培养与植物组织培养有什么相同之处与不同之处？ 原代培养 培养 传代培养 取动物组织 制成 细胞悬液 CO2培养箱 培养 ①机械的方法 ②用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间 【思考】进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的 物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 细胞间的物质主要是蛋白质。 多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4，而胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，在此环境中会失活。 【 ... ...
