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课件网) 第2节 微生物的培养技术与应用 （二）微生物的选择培养和计数（第2课时） ① 从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ② 统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成_____的微生物才能分解尿素，利用 的 培养基，可以从土壤中分离出 的细菌。 脲酶 以尿素作为唯一氮源 选择 分解尿素 CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 脲酶 探究实践--土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 1 实验目的 2 实验原理 土壤取样 制备培养基 土壤稀释 涂布平板 观察培养 菌落计数 ①取样地点：酸碱度接近中性，潮湿，肥沃。 （目的细菌适宜在该环境中生长） ②取样过程：铲去3cm左右表层土,再取土样 （细菌绝大部分分布在距地表3～8cm的土壤层） ③注意事项： 取土样时用的铁铲和取样袋使用前都需要灭菌。操作完成后，要洗手。 3 实验步骤 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 ①选择培养基： ②牛肉膏蛋白胨培养基： 作为对照组，来判断选择培养基是否具有选择作用。 以尿素为唯一氮源。 土壤取样 制备培养基 土壤稀释 涂布平板 观察培养 菌落计数 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 分离微生物：保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，可选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养。例如：将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养。 土壤取样 制备培养基 土壤稀释 涂布平板 观察培养 菌落计数 选择培养基 （实验组：平行重复） 牛肉膏蛋白胨培养基(作为对照) （用以判断选择培养基是否具有选择作用） 测细菌时，一般选用104、105、106倍稀释的稀释液进行平板培养。 土壤取样 制备培养基 土壤稀释 涂布平板 观察培养 菌落计数 组别 具体组别 具体操作 作用 实验组 实验组1 涂布接种的选择培养基 三次重复排除偶然因素对实验 结果的影响，用以分离并计数 能分解尿素的细菌。 实验组2 涂布接种的选择培养基 实验组3 涂布接种的选择培养基 对照组1 涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基 对照组 对照组2 不涂布接种的选择培养基 对照组3 不涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基 实验现象 实验组1、2、3分离得到尿素分解菌的单菌落； 对照组1：得到多种菌落且菌落数明显多于实验组；对照组2、3 组正常情况下无菌落。 检验选择培养基是否具有选择作用。 检验选择培养基中是否有杂菌污染。 检验牛肉膏蛋白胨培养基中是否有杂菌污染。 ① 培养条件：细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。 ② 观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 ③ 一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。 注意事项：本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿（皿底）时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。 土壤取样 制备培养基 土壤稀释 涂布平板 观察培养 菌落计数 102 103 104 105 106 需要的平板，要做好标记 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。 稀释度 104 105 106 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 每个平板的菌落数 土壤取样 制备培养基 土壤稀释 涂布平板 观察培养 菌落计数 102 103 104 105 106 已接种的稀释不同倍数的的选择培养基培养结果 4 结果评价与分析 空白对照 稀释106倍 菌落数 52 菌落数 63 菌落数 77 思考：你能计算出 ... ...
