课件42张PPT。课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题背景1.尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2.常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。[该去哪里取样?][该配置怎么样的培养基?]方法： ⑴造成有利于目的菌株生长的环境 ⑵同时抑制大多数其他类型微生物能分解尿素的细菌不能分解尿素的细菌①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素③此配方培养基为什么能够筛选出产生脲酶的细菌?2.利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物①只是一种细菌吗？②都是能分解尿素的微生物吗？3.请你提供一种方法，判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。1.培养基中有尿素即可以筛选出分解尿素的细菌？4.怎样证明此培养基具有选择性呢？以尿素为 唯一氮源 的培养基牛肉膏 蛋白胨 培养基?是分离 尿素 细菌判断该 培养基 有无选 择性只生长尿素细菌生长多种微生物是如何统计每克土壤样品中 究竟含有多少这样的细菌？计数法显微镜直接计数法 稀释涂布平板法 比浊法 膜过滤法1.显微镜直接计数法：这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。此法的缺点是不能区分死菌和活菌。每毫升原液所含细菌数 ＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。稀释涂布平板注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30———300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。如果106稀释度下的三个重复组菌落数分别为1个、50个、170个。应如何处理这个稀释组的数据？◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30———300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 此记录是否完整？A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)如何证明A同学制作的培养基确实被污染了？如何证明A同学操作有问题？方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 实验设计[一]土壤取样◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封灭菌。①准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。每个稀释度下需要3个选择 ... ...
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