(
课件网) 专题提优 专题8 生物技术与工程 小专题3 基因工程 1．(多选)(2025·江苏卷)图示人体正常基因A突变为致病基因a及HindⅢ切割位点。AluⅠ限制酶识别序列及切割位点为 ，下列相关叙述正确的有 ( ) 考向 1 基因工程操作与应用 BD A．基因A突变为a是一种碱基增添的突变 B．用两种限制酶分别酶切A基因后，形成的末端类型不同 C．用两种限制酶分别酶切a基因后，产生的片段大小一致 D．产前诊断时，该致病基因可选用HindⅢ限制酶开展酶切鉴定 解析：由图示可知，基因A突变为a发生了碱基替换(T//A→G//C)，A错误；Hind Ⅲ切割产生黏性末端，AluⅠ切割后产生的是平末端，二者末端类型不相同，B正确；a基因有2个Hind Ⅲ切割位点，切割后会产生1个约600 bp的片段，有3个AluⅠ切割位点，切割后会产生1个200 bp左右、1个400 bp左右的片段，C错误；因为正常基因A和致病基因a的HindⅢ切割位点数不同，产生的片段大小不同，所以产前诊断时，该致病基因可选用HindⅢ限制酶开展酶切鉴定，D正确。 2．(2024·江苏卷)为了高效纯化超氧化物歧化酶(SOD)，科研人员将ELP50片段插入pET－SOD构建重组质粒pET－SOD－ELP50，以融合表达SOD－ELP50蛋白，过程如图1。其中，ELP50是由人工合成的DNA片段，序列为：限制酶a识别序列－(GTTCCTGGTGTTGGC)50－限制酶b识别序列，50为重复次数。请回答下列问题： 图1 (1)步骤①双酶切时，需使用的限制酶a和限制酶b分别是_____。 (2)步骤②转化时，科研人员常用_____处理大肠杆菌，使细胞处于感受态；转化后的大肠杆菌采用含有_____的培养基进行筛选。用PCR技术筛选成功导入pET－SOD－ELP50的大肠杆菌，应选用的一对引物是 _____。 EcoRⅠ、HindⅢ (3)步骤③大肠杆菌中RNA聚合酶与_____结合，驱动转录，翻译SOD－ELP50蛋白。已知蛋白质中氨基酸残基的平均相对分子质量约为0.11 kDa，将表达的蛋白先进行凝胶电泳，然后用SOD抗体进行杂交，显示的条带应是_____(从图2的“A～D”中选填)。 图2 CaCl2 卡那霉素 S－F和P－R 启动子 C (4)步骤④为探寻高效纯化SOD－ELP50蛋白的方法，科研人员研究了温度、NaCl对SOD－ELP50蛋白纯化效果的影响，部分结果如图3。 图3 ①20 ℃时，加入NaCl后实验 结果是_____ _____ _____。 SOD－ELP50组纯化蛋 白数量更多(或SOD－ELP50溶 液的蛋白质质量比SOD组高) ②100 ℃时，导致各组中所有 蛋白都沉淀的原因是 _____。 ③据图分析，融合表达SOD－ ELP50蛋白的优点有_____ _____ _____ _____。 高温使蛋白变性 低温下添 加NaCl有利于SOD蛋白纯化， 杂蛋白较少，有利于酶活性 的保持 图3 解析：(1)目的基因应插入启动子和终止子之间，结合题意可知，ELP50应插入pET－SOD之后，由图可知，限制酶a和限制酶b分别是EcoR Ⅰ、HindⅢ。(2)将目的基因导入细菌时常用CaCl2处理细菌，使其处于感受态。由图可知，重组DNA含有标记基因卡那霉素抗性基因，所以转化后的大肠杆菌采用含有卡那霉素的培养基进行筛选。成功导入pET－SOD－ELP50重组质粒后，同时含有SOD和ELP50基因，结合图示可知，选引物S－F和P－R可特异性对SOD和ELP50进行扩增。(3)RNA聚合酶与启动子结合后，启动转录。由图可知，SOD和ELP50片段分别为462 bp和750 bp，转录出的mRNA有(462＋750)÷3＝404个密码子，则对应404个氨基酸，其脱水缩合形成的蛋白质相对分子质量约为404×0.11＝44.44 kDa，电泳后应该为条带C。 3．(2025·江苏卷)川金丝猴是我国特有的珍稀濒危物种，为了更好地保护这一物种，研究者开展了以下研究。请回答下列问题： (1)川金丝猴警戒行为具有监测捕食者和同种个体的功能，这说明生物之间的关系有_____。川金丝猴的警戒行为依赖于环境 ... ...
