专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 讨论2：真核生物的遗传物质存在于哪里？ 讨论1：生物体的遗传物质是什么？ 讨论3：怎样才能将真核细胞内的遗传物 质分离来？ 一、实验原理 1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。 DNA在物质的量浓 度为0.14 mol／L的 氯化钠溶液中的溶解 度最低，利用这一原 理，可以使溶解在氯 化钠溶液中的DNA析 出。 2mol/L浓度可使DNA溶解； 0.14mol/L浓度可使DNA析出。 3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 (一)实验材料的选取： 用什么材料提取DNA？为什么？ 鸡血细胞做实验材料。原因： 1. 鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得 2. 鸡血细胞极易吸水胀破 3. 植物细胞外有细胞壁，其他动物细胞制取 DNA有时需匀浆和离心，对设备要求较高， 操作繁琐，历时较长。 2. 若是植物细胞，如何获取DNA滤液？ (二)破碎细胞，获取含DNA的滤液 1. 若是动物细胞，如何获取DNA滤液？ 加入洗涤剂和食盐的作用分别是？ 如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解 会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 (三)去除滤液中的杂质 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？ 可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 根据DNA的理化性质，可以用哪些方法来去除滤液中的杂质？ 为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？(注意：两种食盐溶液的浓度和作用) 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。因此，反复溶解与析出DNA，就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 析出： 滤液+同体积95%冷却酒精 白色丝状物 (四)DNA的析出 (五)DNA的鉴定 如何鉴定？对比反应是为了证明什么？原理？ DNA＋二苯胺 蓝色物 沸水浴 2. 加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3. 二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 1. 以血液为实验材料，每100ml 加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。 操作提示 ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得 DNA最大限度地析出 ⑤使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑥除去含DNA的滤液中的杂质 ⑦提取DNA ⑧A出现蓝色 B无变化 讨 论 此实验过程中有几次过滤，几次析出？ 分别在哪一步？ 答: 整个实验共“两次过滤，两次析出” 过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为1－2层。 两次过滤 第一次： DNA存在于滤液里 第一步 第二次： DNA存在于滤液里 第六步 两次析出 第一次：用0.14 mol／L 的NaCI溶液 第二次：用冷却的95％的酒精 第三步 第七步 方法与过程 1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得） 500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。 2.提取DNA。 ①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。 ②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。 ③原理：血细胞的细胞膜、核摸吸水胀破，玻璃棒快速搅拌，机械加速血细胞破裂。 ⑴.提取血细胞核物质： ⑵.溶解核内的DNA： 滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。 ⑶.析出含 ... ...
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