课件23张PPT。专题整合提升二苯胺 蓝色 去除 滤液中的杂质 柠檬酸钠 引物 变性 复性 高压灭菌粗分离 缓冲液要与凝胶面平齐1．分离DNA、PCR技术、分离蛋白质的比较：专题一 DNA和蛋白质技术2.PCR扩增的常见问题分析： (1)样品扩增后产物比预期少，即出现假阴性。 ①主要原因。 a．Taq DNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制。 b．引物设计不合理导致不能复制。 c．提取的模板质量不过关以及PCR系统的建立欠妥当。 d．循环次数不够等。②预防措施。 a．选用活力高的Taq DNA聚合酶。 b．提取DNA模板时，要注意避免提取物中有抑制酶活性的酚、氯仿等污染物。 c．保证引物与模板DNA互补。(2)样品扩增后产生新DNA，即出现假阳性。 ①主要原因：PCR技术高度灵敏，极其微量的外源DNA也会造成非目的DNA片段的大量增加，因此，外源DNA的污染是PCR出现假阳性结果的主要原因。 ②预防措施：隔离操作区、分装试剂、简化操作程序、使用一次性吸液枪头等。【易错警示】 血红蛋白的提取与分离实验的易错点 (1)红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；要低速、短时间离心，否则会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。 (2)凝胶的预处理：用沸水浴法不但节约时间，而且能除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。(3)色谱柱的装填：装填时尽量紧密，减小颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 (4)色谱柱成功的标志：红色区带均匀一致地移动。1．下列有关物质提取与分离的叙述中，错误的是 A．有机大分子的提取分离在思路上是根据不同物质的不同的理化性质，选择一定的物理化学方法，达到提取与分离的目的 B．叶绿体中色素的分离是纸层析法，其原理是各种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸条上的扩散速度不同［变式训练］C．可以用电泳法从DNA和蛋白质的混合液中提取、分离DNA分子 D．从多种蛋白质的混合液中提取、分离某种蛋白，可以用凝胶色谱法，也可用电泳法解析 生物大分子的提取分离，一般就是根据其固有的理化性质，用不同的物理或化学方法，达到不同成分的分离。叶绿体中色素的分离借助各色素成分在层析液中的溶解度及其在滤纸条上的扩散速度不同而达到分离的目的。不同蛋白质分子由于其相对分子质量、分子大小、形状、带电荷数有很大差异，因此可借助凝胶色谱法或电泳法进行分离。而从DNA、蛋白质的混合液中分离DNA，多借助于二者在NaCl溶液中的溶解度不同来分离，而电泳法难以达到分离DNA的目的。 答案 C2．下列是有关DNA鉴定实验的1管(对照组)与2管(实验组)示意图，图示中恰当的选项是解析 A中的1管中不应加酒精，加二苯胺，错误；在物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液DNA溶解度最大，DNA量溶解状态，有二苯胺，沸水溶液呈蓝色，B中2管正确；C中1管应除去酒精，1管错误；D中2管不应加酒精，错误。 答案 B专题二———DNA粗提取与鉴定”中方法与目的 归纳 【易错警示】 (l)哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 (2)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟鸡血细胞吸水涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液。3．下列DNA粗提取的实验操作中，经过离心或过滤后，取上清液或液液的有［变式训练］A．在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠，混合均匀后离心 B．在盛有血红胞的塑料烧杯中加蒸馏水，快速搅拌后过滤 C．调节NaCl溶液的物质的量浓度至0.14 mol/L后，轻轻搅拌后过滤 D．在溶有DNA的NaCl溶液中缓慢加入蒸馏水，轻轻搅拌后过滤解析 柠檬酸钠能够防止血液凝固，新鲜鸡血经过离心后，上清液中血细胞较少，则A项错误；在血细胞中加入蒸馏水，细胞因吸水而涨破，DNA在滤液中，则B项正确；当NaCl溶液的物质的量浓度为0.14 mol/L时，DNA溶 ... ...
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