实验一 大肠杆菌的培养和分离 【教材解读】 1.微生物 ①细菌：是 ，与真核细胞相比，细菌没有 的细胞核，其 由肽聚糖组成。 ②大肠杆菌：是 性、异养兼性厌氧的肠道杆菌。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的质粒是最常用的 ，它也是基因工程中常用的 。 【注意：根据细胞壁结构的不同，细菌可分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类；革兰氏 菌细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素；如：金黄色葡萄球菌、炭疽芽孢杆菌。革兰氏 菌细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素；如：大肠杆菌】 ③绝大多数微生物与传染病 ，90%以上的微生物是对人类 的。 2.培养基配置 ①微生物的生命活动需要五大营养要素： 水、无机盐、 、 、生长因子； ②有的物质既是 又是 （为微生物生长提供碳元素和氮元素），如：蛋白质、蛋白胨； ③有的既是碳源又是 （是微生物生长不可缺少的微量有机物），如：酵母提取物； ④“细菌喜荤，霉菌喜素”；细菌喜 的温度；霉菌喜 ℃的温度； ⑤细菌的培养基：蛋白胨、 、一定量的 ，以维持一定的 ；通常在 的环境中生长； ⑥霉菌的培养基：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可；通常在 的环境中生长； ⑦在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要适宜的 、 以及特殊营养物质，以满足微生物生长对的要求。 3.培养基的种类及用途： ①液体培养基：呈现液态，用于 和 ； ②固体培养基：配制时需加入琼脂（凝固剂），呈固态，用于 、 、计数等； ③我们一般用LB 来扩大培养大肠杆菌，用 来分离大肠杆菌。 4.灭菌和消毒（重点内容） ①无菌技术：人们利用微生物完成一定的反应，必须要求某种微生物是没有 的，因此，在培养微生物时必须进行 操作； ②灭菌是用 的方法，杀死或除去环境中的 的方法。 的方法叫消毒。如：实验室要对使用前和使用后的培养基、各种容器进行 ；要对实验服、对病人的排泄物和衣物进行 。 ③干热灭菌法：是利用火焰将接种环和试管上的微生物烧死（又称 法），或在140-160℃的烘箱中加热2-3h，将微生物的 杀死。【注意：干热灭菌法只适用于 或玻璃用具】 ④加压蒸气灭菌法（ 法）：这是生产和实验室常用的灭菌法，将灭菌锅内通入压力达到1000g/cm2的 ，锅内温度达 ℃，持续15-30min，即可达到 目的； 注意：当培养基内有葡萄糖时，为防止葡萄糖 ，要用 g/cm2压力（ ℃以上）灭菌30min。⑤过滤灭菌法：有些化合物（尿素、碳酸氢钠等）加热会分解，如培养基中需要时，只能配成溶液单独 灭菌；通常用 过滤。其他型号（如：G1-G5）的不能除菌。 【注意：玻璃砂漏斗使用方法：使用前也要用 灭菌，玻璃砂漏斗有6种型号，即G1-G6，G6孔径最 ， 不能滤过，在使用后需要用 1mol/L 的 浸泡，并 ，再用 洗至洗出液至中性， 后保存】 ⑥紫外线光灭菌法：紫外光谱范围是100-400nm，灭菌最有效的波长为253.7nm，它是 ，可使菌体的 变性，芽孢可在10min内杀死。注意：紫外线对人的皮肤、眼睛等会造成伤害，开启紫外线灯后，人必须 。 5.灭菌操作： ①各种大小的 、试管、 、取样器的头、移液管、 、 、镊子等等，这些用具通常用 灭菌： 试管需加 或塑料盖；三角瓶可用 或6层纱布封口；移液管上端用镊子放入少量 ；取样器的“枪头”放在可灭菌的专用塑料盒中； b.各种用品均用 或 包好； c.在121℃（ g/cm2压力）下灭菌15-30min； d.将实验用具放入60-80℃的 中烘干，以除去灭菌时的 ； e.在进行实验操作前，将需要使用的用具从烘箱中取出，放到 上，然后打开 灯和 ，灭菌30min。 ②培养基、无菌水等使用 灭菌，所用器械是 锅； ③对不能受潮的实验器具使用 灭菌法。 注意事项： ①实验中用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易 ，吸水后容易 。灭菌后，通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的 ； ②在将培养基 ... ...
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