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课件编号8436110
高中生物选修一《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件
日期:2024-05-19
科目:生物
类型:高中课件
查看:71次
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来源:二一课件通
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多聚酶链式反应扩增DNA片段
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) 课题2 多聚酶链式反应 扩增DNA片断 ㈠.DNA分子的结构 C、H、O、N、P 1.元素组成: 脱氧核苷酸 2.基本单位: 一.基础知识 脱氧核苷酸 脱氧核苷 磷酸 脱氧核糖 含氮碱基 嘌呤 嘧啶 腺嘌呤(A) 鸟嘌呤(G) 胞嘧啶(C) 胸腺嘧啶(T) 一个核苷酸上的磷酸基团上的“-OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水,形成磷酸二酯键,即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“-OH”末端称为3’端,而磷酸基团的末端称为5’端 3.多脱氧核苷酸链得形成 多脱氧核苷酸链结构简图 4.DNA分子的双螺旋结构 ⑴.DNA分子是由 的(即一条链为3’-5’,另一条链为5’-3’)脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。 ⑵. 与 交替连结,排列在外侧,构成基本骨架; 排列在链的内侧。 ⑶.两条链上的碱基通过 连结起来,形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律:即腺嘌呤一定与 配对, 一定同胞嘧啶配对。 双螺旋 两条反向平行 脱氧核糖 磷酸 碱基 氢键 胸腺嘧啶 鸟嘌呤 ㈡.DNA的复制 2.时期 有丝分裂间期减数第一次分裂前的间期。 3.场所 细胞核(主要)、线粒体、叶绿体。 1.概念 由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程。 4.基本条件 酶:解旋酶、DNA聚合酶 能量:ATP 原料:四种脱氧核苷酸 模板:DNA的两条链 ⑴.边解旋边复制(过程) 5.复制特点 ⑵.半保留复制(结果) 6.遵循原则: 碱基互补配对原则 7.精确复制的原因 8.复制的意义 DNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代,从而保持了遗传信息的连续性 ⑴规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板 ⑵碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 总结:胞内DNA复制的基本体系 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 ㈢.PCR(多聚酶链式反应) 2.DNA聚合酶作用过程 当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后, DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链,DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 1.定义: 是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。能以极少量的DNA为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 3.PCR原理 PCR利用了DNA的热变性原理,通过控制温度来控制双链的解聚与结合。在80-100°C的温度范围内,DNA的双螺旋结构将解体,双链分开,这个过程称为变性。当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。 耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题,促成了PCR技术的自动化。 4.Taq DNA聚合酶的应用 5.需要为PCR反应提供的物质 缓冲液、DNA模板,分别与两条模板链相结合的两种引物,四种脱氧核苷酸,耐热的DNA聚合酶,同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。 靶序列 靶序列 PCR 循环第一步: 靶序列 靶序列 引物 Ⅰ 引物 Ⅱ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ PCR 循环第二步 靶序列 靶序列 引物Ⅰ 引物Ⅱ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ Taq DNA 聚合酶 PCR 循环第三步 : 靶序列 靶序列 第1个PCR循环完成后 :得到两个靶序列 体内复制 PCR技术 解旋 在解旋酶作用下,细胞提供ATP,部分解开 加热到94oC,双链全部解开,不需解旋酶 引物 一小段RNA 一般用DNA片段 DNA聚合酶 细胞自身的DNA聚合酶(不耐高温) TaqDNA聚合酶 复制特点 半保留复制,边解旋边复制,多起点复制。 半保留复制,完全解旋后复制,从模板链的一端开始复制。 复制的方向 子链的5’端向 3’端延伸 子链的5’端向 3’ ... ...
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