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课件网) 01. 动物细胞培养（基础） 02. 动物体细胞核移植技术 03. 动物细胞融合 04. 生产单克隆抗体 动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养 思考讨论 问题1：在治疗烧伤病人时，常用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。若是大面积烧伤，自体健康皮肤有限，他人健康皮肤来源不足，并且会产生排斥反应？那么，如何才能获得大量的自体健康的皮肤呢？ 问题2：许多动物细胞能分泌蛋白质，如抗体。但是，单个细胞产生的蛋白质是很少的，如何才能获得大量的分泌蛋白呢？ 一、动物细胞培养 1、概念： 就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理： 细胞增殖 回顾：植物组织培养的原理是： 细胞的全能性 (1) 选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 3.培养： 原因：它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 (2)处理： 分散成单个细胞,制成细胞悬液 在进行动物细胞培养时，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶分散细胞。 动物细胞培养过程中涉及到名词解释 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上(单层)。 要求： 培养瓶（皿）内表面光滑、无毒、易于贴附。 接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 接触抑制 原代培养 传代培养 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬液 10代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 剪碎、用胰蛋白酶处理 （或胶原蛋白酶） 细胞贴壁，出现接触抑制 用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 50代细胞 (3)过程 原代培养 思考： （1）为什么要将组织块分散成单个细胞培养？ 分散成单个细胞便于从培养液中获得营养，排出代谢废物，利于继续培养。 （2）动物细胞培养能否最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。 思考： （3）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 能够用胃蛋白酶代替吗？ 胰蛋白酶除了消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白；因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间。 不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 无菌、无毒 的环境 营养 观察体外培养细胞的图片 适宜的温度和PH、气体环境等 （1）无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素？定期更换培养液？） （2）营养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、微量元素（合成培养基）+动物血清等 （3）温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 （4）气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 4.动物细胞培养条件 离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力 CO2 作用？ P46 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。 血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。 因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。 5.植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 相同点 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖、植物激素 葡萄糖,动物血清 快速繁殖、 培育无病毒植株 获得细胞或细胞的产物 都有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等 植物体 细胞群体 6.动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等； ... ...
