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课件网) 从社会中来 在治疗大面积烧伤时，通常采 用的方法是取烧伤病人的健康 皮肤进行自体移植。但对这样 的病人来说，自体健康皮肤非 常有限，使用他人皮肤來源又 不足，而且会产生免疫排斥反 应。那么,怎样才能获得大量 的自体健康皮肤 能不能用自体 皮肤的单个细胞培养出可供移 植的皮肤 通过细胞培养构 建的人造皮肤 一动物细胞培养 一、动物细胞培养 1.动物细胞工程常用技术 (1)常用技术： 动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞 核移植等。 (2)基础：动物细胞培养。 2 .动物细胞培养 (1)概念： 从动物体中取出相关的组织，将它分散成 单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让 这些细胞生长和增殖的技术。 是液体培养基，即培养液 ②无菌、无毒的环境 a .对培养液和所有培养用具进行灭菌处理。 b. 在无菌环境下进行操作。 c. 培养液需定期更换，以清除代谢物，防止细胞 代谢物积累对细胞自身造成危害。 (2)培养条件 ①营养 a.成分： 糖类、氨基酸、无机盐、维生素等。 将细胞所需的营养物质按种类和 所需量严格配制而成的培养基。 需加入天然成分：血清。 b. 类型： 属于合成培养基 ④气体环境 a .动物细胞培养所需气体主要有O 和CO 。 b. 在进行细胞培养时，通常采用培 养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含 有95%空气和5%CO 的混合气体的 CO 培养箱中进行培养。 ③温度、pH 和渗透压 a. 温 度 ：以36.5℃±0.5℃为宜。 b.pH: 以 pH 为7.2～7.4为宜。 CO 主要作用：维持培养液的pH。 c. 适宜的渗透压：培养液的渗透压与细胞内液渗透压相等 O 作用：细胞代谢所必需的。 CO 培养箱 培养瓶 培养皿 (3)培养过程 ①体外培养的动物细胞类型 悬浮在培养液中生长增殖的细胞 贴附于某些基质表面生长增殖的细胞 ①原代培养：指动物组织经处理后的初次培养。 ②细胞贴壁：悬液中分散的细胞往往贴附在培养瓶 的瓶壁上。 ③接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触 时，细胞停止分裂增殖的现象。 ④传代培养：分瓶后的细胞培养。 ②过程 动物组织块 用机械法或用胰蛋白酶、 山胶原蛋白酶等处理 分散成单个细胞 业 制成细胞悬液 原代培养 问题 分瓶 传代培养 细胞密度过大、 有害代谢物积 累和营养物质 缺乏等 接触抑制 悬浮生长 贴壁生长 解决 细胞分 裂受阻 原因 原因 单层贴壁的猪输 卵管上皮细胞 山 思考 ·讨论 有关动物细胞培养的问题 1.幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度 低的细胞与分化程度高的细胞比较，哪些细胞更易于 培养 为什么 幼龄动物的细胞和分化程度低的细胞更易培养，原 因是这些细胞分裂能力强。 2.动物细胞培养时，除了添加糖类、氨基酸等必要的 营养成分外，往往还需添加血清等一些天然成分。为 什么 人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，血 清等一些天然成分的营养成分比较齐全，可以弥补 人工培养基的不足。 思考· 讨论 有关动物细胞培养的问题 3.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散 细胞，说明细胞间的物质主要是什么 用胃蛋 白酶可以吗 为什么 蛋白质；不可以；多数动物细胞生存的适宜 pH为7.2～7.4,胃蛋白酶(适宜pH为1.5左右) 在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中 活性较高，因此胰蛋白酶适用于细胞培养时的 处理。 1.动物细胞培养的相关处理 (1)使细胞分散开的原因：一是能保证细胞 所需要的营养供应；二是能保证细胞内有害 代谢物的及时排出。 (2)使用胰蛋白酶时，要控制好作用时间， 因为胰蛋白酶不仅能分解细胞间的蛋白质， 长时间作用还会分解细胞膜蛋白等，对细胞 造成损伤。进行动物细胞培养时不能用胃蛋 白酶分散细胞，主要是因为pH 不合适。 (3)动物细胞的整个培养过程中可能多次用 到胰蛋白酶或胶原蛋白 ... ...
