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课件网) 第3章 第2节 基因工程的基本操作程序 （第2课时） 【学习目标】 1.掌握基因表达载体的组成，并理解构建基因表达载体的目的 2. 构建基因表达载体模型，通过动手操作，探究双酶切和单 酶切连接产物的不同 3、结合实例，列举将目的基因导入受体细胞的方法 4、理解目的基因检测与鉴定的原理和方法 1、转基因抗虫棉的培育哪几个步骤？ 1.目的基因的筛选与获取 4.目的基因的检测与鉴定 2.基因表达载体的构建 3.将目的基因导入受体细胞 基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序 回顾 目的基因的筛选与获取 (1)目的基因： (2)培育转基因抗虫棉的目的基因？来源？ 2、目的基因 Bt抗虫蛋白基因，简称Bt基因， 来自苏云金杆菌 主要指的是编码蛋白质的基因。 回顾 回顾 3、获取目的基因的方法 （1）人工合成目的基因 （2）PCR 特异性地快速扩增目的基因(常用） （3) 通过构建基因文库来获取目的基因 能不能直接将获取的Bt基因导入棉花细胞，为什么？如果不能，如何避免该结果的发生呢？ 不能。游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，且游离的DNA片段不能稳定遗传。 构建基因表达载体（核心工作） 思考 基因表达载体的构建（核心工作） 确保基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时使目的基因能够表达和发挥作用。 1、目的： 思考：要使目的基因在受体细胞中稳定存在，需要哪种工具？ 要使目的基因能够表达和发挥作用，载体还需要哪些结构？ 基因表达载体的构建（核心工作） 2、基因表达载体的组成 【任务1】小组合作，利用小工具包里面的组件，在白色卡纸的相应位置上粘贴基因表达载体的组件并标上名称，并思考以下问题 (1)各组件的作用？ (2)目的基因插入的位置 目的基因：能控制表达所需要的蛋白质 启动子： 位置：基因的上游 功能：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。 复制原点： DNA复制的起始位点 终止子： 位置：基因的下游 功能：终止转录 标记基因：便于重组DNA分子的筛选和鉴定 基因表达载体的构建（核心工作） 基因表达载体的构建（核心工作） 启动子 终止子 起始密码子 终止密码子 位置 作用 DNA mRNA 转录的起点和终点 翻译的起点和 终点 思考：启动子、终止子与起始密码子、终止密码子的区别？ 基因表达载体的构建（核心工作） 【任务2】构建基因表达载体 1、利用图示的质粒和Bt基因构建基因表达载体，可以选择什么样的限制酶？ 基因表达载体的构建（核心工作） 2、现已通过PCR获取了如下两种Bt基因，小组合作，利用手中的教具构建基因表达载体并粘贴到白板上(仅考虑目的基因与载体连接），蓝色环状纸带—质粒，粉色条带—目的基因，剪———限制酶，胶带—DNA连接酶 EcoRⅠ：G↓AATTC HindⅢ：A↓AGCTT 单酶切其它链接情况 双酶切与单酶切相比有什么优点？ 3、总结限制酶的选择原则 (1)不破坏目的基因原则 (2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则 (3)确保出现相同黏性末端原则 (4)为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，使用双酶切法 将目的基因导入受体细胞 1.目的基因导入植物细胞 花粉管通道法（我国科学家独创） 农杆菌转化法（最常用） 常用方法： 将目的基因导入受体细胞 1.目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 （可转移的DNA） 农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。 自主学习课本81页，明确农杆菌侵染的植物种类？农杆菌转化法的原理？ 构建表 ... ...
