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课件网) 3.2.2 动物细胞工程（二） 动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 二、单克隆抗体 动物细胞融合与单克隆抗体 三、动物细胞融合 概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。 原理：动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同（磷脂分子重新排布）。 诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。 物理方法：电融合法、离心法 化学方法：聚乙二醇(PEG) 高钙—高pH培养法 灭活的仙台病毒诱导 灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子_____，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活：是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去_____能力，但是并不破坏这些病原体的_____结构。 重新排布 感染 抗原 利用细胞融合进行基因定位 已知人的体细胞和小鼠的体细胞(2N=40) 杂交(融合)后，杂种细胞在有丝分裂过程中，人的染色体逐渐地丢失，最后仅保留少数几条。由于人染色体的丢失是随机的，因此不同的杂种细胞会保留不同的人染色体。 结论：人胸苷激酶基因位于17号染色体上。 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞的全能性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后 诱导细胞融合 物理、化学方 法、灭活的病毒 制备单克隆抗体 物理、化学方法 4、意义： 细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使_____成为可能。至今种间、属间、科间，甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得了成功。目前，这一技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造_____开辟了新途径。 远缘杂交 单克隆抗体 一、动物细胞融合 二、单克隆抗体 动物细胞融合与单克隆抗体 1、传统抗体的缺陷 长期以来，人们为了获得抗体，采用的方法是向动物体内_____，使动物产生抗体，然后，从动物_____中分离所需抗体。这种方法不仅_____，而且_____。 B1 B2 B3 1 2 细菌 3 反复注射某种抗原 血清 产量低、 纯度低 特异性差 传统抗体是多克隆抗体 四、单克隆抗体 动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞_____。 只产生一种抗体 克隆 B淋巴细胞与癌细胞融合形成杂交细胞 四、单克隆抗体 因此，要想获得大量的单一抗体，必须_____单一的B淋巴细胞，形成细胞群。遗憾的是，在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的，解决这一问题的思路是让 _____。 选择培养基筛选 单克隆抗体 诱导融合 注射特定蛋白免疫小鼠 培养小鼠 骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞（A） 多种细胞 多种杂交瘤细胞 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 选择培养基筛选 专一抗体检测 注射到小鼠 腹腔内增殖 体外培养 注射特定蛋白免疫小鼠 培养小鼠 骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞（A） 多种细胞 多种杂交瘤细胞 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 克隆化培养 专一抗体检测 注射到小鼠 腹腔内增殖 体外培养 资料：细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能无限增殖。鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径。 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞（A） 合成DNA D途径 S途径 D途径 氨基喋呤 A、B、AA、BB、AB1、AB2、AB3 选择性培养基： 在该培养基上，_____细胞和_____的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。 未融合的亲本 融合的具有同种核 AB1、AB2、AB3 。。。。。。 专一抗体检验阳性：有限稀释法 用羊的红细胞对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应 ... ...
