第47讲 植物组织培养技术及DNA和蛋白质技术（原卷版） 一、 DNA的粗提取与鉴定 1.基本原理 (1)DNA的粗提取:利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。 (2)DNA与蛋白质在物理、化学性质方面的差异 比较项目 DNA 蛋白质 2 mol/L NaCl溶液中 溶解 析出 0.14 mol/L NaCl溶液中 酒精溶液中 溶解 蛋白酶 无影响 高温 ℃以 上变性 不能忍受 ℃的 高温 (3)DNA的鉴定:DNA+ 蓝色。 2.操作流程 材料的选取:选用DNA含量相对较高的生物组织 ↓ 破碎细胞(以鸡血为例):鸡血细胞→加 →用玻璃棒搅拌→用纱布过滤→收集滤液 ↓ 去除杂质:利用DNA在 中溶解度不同,通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质 ↓ DNA的析出:将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的 溶液 ↓ DNA的鉴定:在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂,混合均匀后,将试管在沸水中加热5 min,溶液变成 3.明确实验中三种重复操作的目的和作用 (1)加2次蒸馏水 ①加到鸡血细胞液中,使 。 ②加到含DNA的2 mol/L的NaCl溶液中,使NaCl溶液的物质的量浓度下降到0.14 mol/L,使DNA析出。 (2)用纱布过滤3次 ①过滤血细胞破裂液,得到 。 ②滤取0.14 mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物)。 ③过滤溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液。 (3)用NaCl溶液4次 ①用2 mol/L的NaCl溶液,过滤除去 。 ②用0.14 mol/L的NaCl溶液,析出DNA。 ③用2 mol/L的NaCl溶液,溶解滤取的 黏稠物。 ④用2 mol/L的NaCl溶液,溶解丝状物用于DNA的鉴定。 二、 蛋白质的提取和分离 1.方法及原理 方法 原理 凝胶色谱法 根据 分离蛋白质 电泳法 各种分子 的差异以及分子本身大小、形状的不同 2.实验操作程序 样品处理:红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红 蛋白溶液 ↓ 粗分离:用透析法除去样品中相对分子质量较小的杂质 ↓ 纯化:用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化 ↓ 纯度鉴定:用 法来测定蛋白质的相对分子质量,即对血红蛋白进行纯度鉴定 判断下列说法的对错： 1.用菜花替代鸡血作为实验材料进行“DNA的粗提取与鉴定”实验，其实验操作步骤相同( ) 2.利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色( ) 1．为了探究一种新型碱性纤维素酶的去污效能，研究性学习小组进行了相关实验，结果如图。由图中实验结果能直接得出的结论是 ( ) A．碱性纤维素酶对污布类型2的去污力最强 B．不同类型洗衣粉影响碱性纤维素酶的去污力 C．碱性纤维素酶对污布类型2、3的去污力不同 D．加大酶用量可以显著提高洗衣粉的去污力 2．下列有关血红蛋白的提取的叙述，错误的是 ( ) A．凝胶色谱法是一种根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法 B．电泳只是利用待分离样品中各种分子带电性质不同，从而迁移速度不同来分离蛋白质的 C．血红蛋白的提取和分离一般按照样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定的顺序进行 D．装填色谱柱时要尽量紧密，减小颗粒间隙；避免出现气泡；洗脱液不能断流 3.如图是利用鸡血粗提取DNA的基本操作，据图分析回答： (1)若乙为鸡血细胞液，则甲为_____，该操作的实验目的是__。? (2)若乙为含DNA的浓NaCl溶液，则甲为_____，该操作的实验目的是去除_____(填“不溶”或“可溶”)性杂质。? (3)若该操作玻璃棒上能卷起白色丝状物，则甲为_____。? 4. 某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下: 材料处理:称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各 2份,每份10 g。剪碎后分成两组,一组置于20 ℃,另一组置于-20 ℃条件下,保存24 h。 DNA粗提取: 第一步:将上述材料分别放入研钵中,各加入15 mL研磨液,充分研磨。用两层纱布过滤,取滤液备用。 第二步:先向6只小烧杯中分别 ... ...
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