专题九 生物技术实践 [考纲要求] 1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用。4.利用微生物进行发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用。5.从生物材料中提取某些特定的成分。6.运用发酵加工食品的基本方法。7.测定食品加工中可能产生的有害物质。8.蛋白质的提取和分离。9.酶活力测定的一般原理和方法。10.酶在食品制造和洗涤等方面的应用。11.制备和应用固定化酶。 知识主线 思维串联 微专题1 微生物的培养、分离和计数 1.把握消毒与灭菌的6种常用方法 (1)消毒：酒精消毒法、巴氏消毒法、紫外线消毒法 (既可消毒，又可防止营养物质破坏) (2)灭菌：灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法(主要针对培养基)) 2.培养基制备与微生物纯化技术 提醒：①为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养基在适宜条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。 ②平板划线法只适用于微生物的纯化，不适合进行计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。 末端可分离得到一个单独的细菌细胞 3.筛选目的微生物的原理与实例 (1)原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。因此，可以通过配制“选择”培养基、控制培养条件等选择目的微生物。 (2)实例 4.微生物计数的“两”种方法 (1)直接计数法：显微镜直接计数法。 (2)间接计数法：稀释涂布平板法(活菌计数法)，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 5.关注两种对照组与一种重复组 (1)将一未接种的选择培养基与接种的选择培养基一起培养———用于确认培养基灭菌是否彻底(制备是否合格)； (2)将一接种的普通培养基与接种的选择培养基一起培养———用于确认选择培养基是否起到“筛选”作用； (3)进行微生物计数时，每一稀释度下涂布三个平板，即设置重复组，是为了求平均值，提高计数准确度。 6.归纳细菌培养和计数方法的4个易错易混点 (1)制备固体培养基最后要将平板倒置，其主要目的是防止培养皿上的水珠滴入培养基造成污染。 (2)平板划线法中的“连续划线”及稀释涂布平板法中的“系列稀释”目的是一样的，都是为了保证菌种在培养基中单个分布(平板划线法中最后一次划线的末端一般为单个分布)。 (3)稀释涂布平板法能分离细菌，也能计数(结果偏小)。平板划线法只能纯化细菌，不能计数。 (4)显微计数法：不能区分细菌死活(计数结果偏大)。 题型一 综合考查微生物的培养与纯化技术 1.(2019·全国卷Ⅰ，37)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。 Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5 g/L)。 Ⅱ号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15 g/L)。 Ⅲ号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45 g/L)。 回答下列问题。 (1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是_____。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是_____。 (2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_____，其原因是_____ _____。 (3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是_____。 (4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_____和_____。 解析 (1)牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏、蛋白胨为微生物提供了氮源，而Ⅱ号、Ⅲ号培养基中除X外的其他物质均不含碳，所以能为微生物提供碳源的有机物是X。(2)因为Ⅱ号培养基中碳源只有X， ... ...
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