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课件网) 资料一：刑侦破案杀手锏———法医DNA鉴定技术，需要用到大量凶手DNA。 资料二：肝炎病毒感染初期症状并不明显，抽取的血液中病毒含量也很少，在检测技术比较落后的时期常常造成误诊。 资料三：新型冠状病毒(2019-nCoV)抗体检测、新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测。新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒是用于快速进行体外定性检测新型冠状病毒(RdRp基因、N基因、E基因)的医疗检测用品。它的工作原理是通过提取病人样本中的RNA，进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)，通过扩增反应将样本中微量的病毒信息进行放大，最后以荧光的方式读取信号。如果PCR之后信号为阳性，那么就可以认为样本中存在病毒(已经感染)，反之表明样本中没有病毒(未感染)。 资料四：在刑事侦破案件或遗传病的诊断过程中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。现在PCR技术已广泛应用于遗传病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和基因测序。 专题5 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 华师附中汕尾学校 杨宇涛 一、基础知识 （一）PCR原理 1.多聚酶链式反应（PCR）：一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。 2.细胞内的DNA复制（回顾） ①DNA的基本单位：脱氧核糖核苷酸 ②DNA分子的结构： 含氮碱基 磷酸 5 脱氧 核糖 O 1 2 3 4 5 DNA的羟基(-OH)末端称为3'端，而磷酸基团的末端称为5'端。 3' 3' 5' 5' 一、基础知识 （一）PCR原理 2.细胞内的DNA复制（回顾） ①DNA的基本单位：脱氧核糖核苷酸 ②DNA分子的结构：（两条链）反向平行，双螺旋结构 ③DNA复制的时间：发生在有丝分裂的间期和减数第一次分裂间期 ④DNA复制的场所：细胞核（主要）、线粒体、叶绿体 ⑤DNA复制的特点：边解旋边复制、半保留复制、多起点复制 一、基础知识 （一）PCR原理 2.细胞内的DNA复制（回顾） ⑥DNA复制的条件 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 工作需要消耗ATP 催化脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键 不能从头开始合成，只能从3'端延伸DNA链 子链只从引物3'端开始延伸； 子链的合成方向总是5’端向 3’端。 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 作为DNA复制的起点 一、基础知识 （一）PCR原理 3.PCR(体外的DNA复制)的条件 ①DNA分子的热变性原理 在80-100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链重新结合成双链，这个过程称为复性。 参与的组分 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 DNA双链 单链 变性（加热80-100℃） 复性（缓慢冷却） √ √ 一、基础知识 （一）PCR原理 3.PCR(体外的DNA复制)的条件 ②耐高温的Taq DNA聚合酶 高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化。 自然引物（细胞内的DNA复制）：RNA ③引物 人工引物（PCR）：DNA单链（主要）或RNA 分别与两条模板链相结合的两种引物（引物Ⅰ和引物Ⅱ） 参与的组分 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 √ √ √ √ 一、基础知识 （一）PCR原理 3.PCR(体外的DNA复制)的条件 ①控制温度，但不需解旋酶； ②DNA模板； ③四种脱氧核苷酸； ④耐高温的聚合酶（Taq DNA聚合酶）； ⑤分别与两条模板链相结合的两种引物（引物Ⅰ和引物Ⅱ）； ... ...
