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课件网) 专题3 植物组织培养技术 3.2 月季的花药培养 花中皇后—月季又称“月月红”，自然花期5至11月 （一）单倍体育种的过程？ 花药离体培养（N） 单倍体植株（N） 秋水仙素处理，使染色体翻倍 植株（2N） 特点：1、 明显缩短育种年限 2 、后代植株都为纯合子。 正常植株（2N） （二）产生花粉植株的两种途径 花粉 花粉 胚状体 愈伤组织 丛芽 生根 移栽 脱分化 分化 再分化 诱导 脱分化 形成原因：主要取决于培养基中 种类及其浓度配比。 激素 注：胚状体的结构及其发育过程与种子相似，所以把胚状体到丛芽的过程称为分化，而把从愈伤组织到丛芽的过程成为再分化 1.为什么胚状体和愈伤组织到丛芽分别称为分化和再分化？ 思 考 2.花粉培育的植株，高度不育，有没有利用价值？ 用于单倍体育种技术，可明显缩短育种周期，培育纯合新品种。 胚状体就像种子，有胚芽、胚轴、胚根等结构。胚状体到丛芽就是由原始的分化状态继续生长和分化完成的。 而愈伤组织形成丛芽的过程是从脱分化状态进入再分化形成丛芽的过程。 【烟草花药培养】 胚状体发育途径 愈伤组织转接种到再生培养基 愈伤组织分化形成再生植株 【水稻花药培养】 愈伤组织发育途径 部分花药产生愈伤组织 接种在平板上的水稻花药 接种的花药 胚状体 丛芽 1、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同. 同一植物不同生理状况诱导成功率不同. （一般选月季的初花期） 合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） 2、培养基的组成（ MS培养基+不同比例的植物生长调节激素） 此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等 （三）影响花药培养的主要因素 a.材料选择什么时期最好，为什么？ b.如何选择单核期细胞？ c.为什么不选择单核期之前的花药？ d.为什么不选择单核期之后的花药？ 请阅读P38-39并思考： 诱导花粉植株能否成功及成功率的高低，主要影响因素是 和 。 培养基的组成 材料的选择 花期为初花期，花粉发育在单核靠边期，成功率最高。 选择完全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。 花药质地幼嫩，容易破碎 花瓣开始松动，给材料消毒带来困难 二、实验操作 （一）、材料的选取 （二）、材料的消毒 （三）、接种和培养 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 1、 从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 步骤： 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 方法：醋酸洋红法 (将染色体染成红色) 机理：醋酸洋红为 性染色剂， 易被碱性染料着色染成红色。 碱 染色体 碱性染料不是通常所说的酸碱性，而指染料中着色基团是阴离子/阳离子，若为阳离子则为碱性染料。 （一）材料选取 步骤：花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色） 3. 对于某些植物的花粉不易着色，采用的方法是： 。花粉细胞核被染成 色。 焙花青-铬矾法 蓝黑 （一）材料选取 （无菌吸水纸） 吸干水分 （0.1％氯化汞溶液） 2～4分钟 （无菌水） 冲洗 花蕾 （70％酒精） 浸泡约30秒 （无菌水） 清洗 1. 在消毒时，为什么是对花蕾消毒而不是对花药消毒？ 花药外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 2.为什么花瓣松动会给消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 （无菌吸水纸） 吸干水分 （或者质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） （二）材料的消毒 可使细菌蛋白质变性，为有毒物质，若沾到皮肤则应立即用肥皂水或清水冲洗 与CO2反应生成次氯酸，次氯酸有强氧化性可 ... ...
