(
课件网) 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA 片段 一、PCR原理与条件 1.PCR的概念:PCR即_____,是一种体外迅速扩增_____的技术。 它能以极少量的DNA 为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 必备知识·自主学习 多聚酶链式反应 DNA片段 2.细胞内DNA复制的基本条件: 参与的组分 在DNA复制中的作用 _____ 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的_____ 4种_____ 合成子链的原料 _____ 催化合成DNA子链 引物 使DNA聚合酶能够从引物的 ____端开始连接脱氧核苷酸 解旋酶 模板 脱氧核苷酸 DNA聚合酶 3′ 3.PCR原理: (1)DNA变性:在_____的温度范围内,DNA 的_____将解体,双链分 开。? (2)DNA复性:当温度缓慢降低后,两条彼此分离的_____又会重新结合成双 链。? (3)子链的合成:DNA 聚合酶从引物的_____开始延伸DNA 链。 80～100 ℃ 双螺旋结构 DNA 链 3′端 4.PCR条件: (1)原料:_____。 (2)模板:加热变性解旋后的___条DNA母链。 (3)酶:_____。 (4)引物:使DNA 聚合酶能够从引物的_____开始连接脱氧核苷酸。 (5)其他条件:需要稳定的_____和能自动调节温度的温控设备等。 4种脱氧核苷酸 两 耐高温的DNA聚合酶 3′端 缓冲溶液 二、PCR过程与结果 1.PCR过程: 过程 温度 主要变化 变性 ___ ℃ 双链DNA解旋为_____ 复性 ___ ℃ _____通过碱基互补配对分别与两条_____ 结合 延伸 ___ ℃ 溶液中的四种脱氧核苷酸(A,T,G,C)在_____ 的作用下,遵循_____原则合成新的DNA链 95 单链 55 两种引物 单链DNA 72 DNA聚合酶 碱基互补配对 2.PCR的结果:DNA聚合酶只能特异地复制处于_____的DNA序列,使这段 固定长度的序列呈_____扩增。 两个引物之间 指数 三、PCR实验操作 1.实验用具: 名 称 作 用 PCR仪 自动调控_____,实现DNA的扩增 微量离心管 实际上是进行PCR反应的_____ 微量移液器 用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体,每吸取一种 试剂后,其上的枪头都必须_____ 温度 场所 更换 2.实验步骤: (1)准备:按照PCR反应需要的物质和条件,将需要的试剂和仪器准备好。 (2)移液:用_____按照配方在微量离心管中依次加入各试剂。 (3)混合:盖严微量离心管口的盖子,用手指轻弹_____,使反应液混合均匀。 (4)离心:将微量离心管放在离心机上,离心约10 s,使反应液集中在_____。 (5)反应:将离心管放入_____中进行反应。 3.DNA含量的测定: (1)测定原理:DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,峰值的大小与_____ ___有关。 (2)计算方法:DNA含量(μg/mL)=_____×稀释倍数。? 微量移液器 管的侧壁 离心管底部 PCR仪 DNA含 量 50×(260 nm的读数) 【易错辨析】 1.DNA聚合酶只能从引物的3 ′端延伸DNA链,因此DNA合成的方向总是从子链的 5′端向3 ′端延伸。 ( ) 2.PCR的每次循环依次为变性、延伸、复性。 ( ) 分析:PCR技术分为变性、复性和延伸三步。 3.PCR反应中缓冲液的作用类似生物体内内环境的作用。 ( ) 分析:内环境的稳态可以保证细胞的生命活动正常进行。 √ × √ 4.高压灭菌的微量移液器枪头每吸取一种试剂后不需要更换。( ) 分析:为避免外源DNA等因素的污染,在微量离心管中添加反应成分时,每吸取一 种试剂后,移液器上的枪头都必须更换。 5.PCR过程与细胞内的DNA复制一样,都是边解旋边复制的过程。 ( ) 分析:PCR利用DNA热变性原理,当温度升高到90 ℃以上时,DNA双螺旋结构全部 打开,因此PCR过程是全解旋复制。 × × 关键能力·合作学习 一、细胞内DNA复制与PCR扩增的比较 项 目 细胞内DNA复制 PCR扩增 不同点 时间 有丝分裂间期和减数 第一次分裂前的间期 人工控制 随时进行 场所 细胞内 细胞外(PCR仪) 解旋 解旋酶 高温变性 合成酶 DNA聚合酶 耐热的DNA 聚合酶 特点 边解旋边复制 全解旋复制 循环次数 生物 ... ...
