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课件网) 续表 变性 当温度超过 ℃时，双链DNA解聚为 温度下降到 ℃左右时，两种 通过碱基 复性 互补配对与两条单链DNA结合 当温度上升到 ℃左右时，溶液中的4种脱 延伸 氧核苷酸在耐高温的 的作用下，根 据碱基互补配对原则合成新的DA链 组成 作用 a.紧挨转录的起始位点，是RNA ①目的基因 聚合酶识别和结合的部位 ②启动子 b.转录的终点 ③终止子 c.鉴别受体细胞中是否含有目 ④标记基因 的基因 d.能够控制特定性状 受体细胞 导入方法 ①植物细胞 a.农杆菌转化法 b.显微注射技术 ②动物细胞 c.Ca2+处理法 ③微生物细胞 d.花粉管通道法 检测目的 检测方法 ①是否导入受体细胞 a.抗原-抗体杂交技术 ②是否转录出了mRNA b.如抗虫或抗病的接种实验 ③是否翻译成蛋白质 ④是否赋予生物某些特性 c.PCR等技术 位置：基因的上游 启动子 功能： 识别和结合的 部位，驱动基因的 :人们所需要的基因 表达载体 终止子位置：基因的 功能：RNA聚合酶脱离部位，终 止转录 :用于鉴别受体细胞中是否含有 ,从而将含有目的基因 的细胞筛选出来 5 5 3 约95℃ 3 51 5′ 3 载体（质粒） DNA分子（含目的基因） 限制酶切割 带有黏性末端（或 带有相同黏性末端（或平 平末端)的切口 末端)的目的基因片段 DNA连接酶 重组DNA(重组质粒) PstI SmaI i EcoR I 含抗原基 因的DNA 抗原基因 表达 Pstl 载体 抗卡那霉 素基因 质粒 SmaI EcoR] Apal 进入下一 次扩增 ①高温变性 ②低温复性 ③适温延伸 (9095℃) (45~55℃) (65~75℃) 将目的基因插入 染色体DNA中 导入植物 转入农 细胞 杆菌 质粒 T-DNA 携带外含目的基 含重组 植物 表现出 源基因因的重组 Ti质粒的 细胞 新性状 的DNA Ti质粒 农杆菌 的植株 图1 目的 基因 子房 图2花粉管通道法 图3将目的基因注射 到动物细胞 迷取青蒿酶↓CDNA P(R,含s基因的 酶2 总RNA DNA片段 混合 质粒a酶 2 酶3 重组质粒 菌 青蒿 移液 用 按照配方或PCR试剂盒的说明书向微 量离心管中依次加入各组分 离心 盖严离心管的盖子，将微量离心管放入离心机里，离 心约10s,使反应液集中在管的 反应 设置好PCR仪的循环程序，将离心管放入 进行反应 琼脂 制作琼脂糖凝胶放入电泳槽内→将电泳缓冲液加入 糖凝 电泳槽内→将扩增的PCR产物与凝胶载样缓冲液 胶电 混合→用微量移液器将混合液加样（留一个加样孔 泳 加入指示分子大小的标准参照物)→接通电源，电泳 取出凝胶置于紫外灯下观察和照相
