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课件网) 第1课时 目的基因的筛选与获取 任务一 利用获取和扩增目的基因 任务二 探究·实践片段的扩增 及电泳鉴定 1.目的基因 (1)概念：用于改变_____或获得预期表达产物等的基因。 (2)类型：主要是指编码_____的基因。 (3)举例： 基因通过产生_____，破坏鳞翅目昆虫的消化系 统杀死棉铃虫。 受体细胞性状 蛋白质 抗虫蛋白 2.筛选合适的目的基因 (1)较为有效的方法：从相关的_____中进行 筛选是较为有效的方法之一。 (2)认识基因结构和功能的技术方法：_____技术、_____ __、_____工具。 已知结构和功能清晰的基因 测序 序列数据库 序列比对 3.利用 获取和扩增目的基因 (1) 全称：_____。 聚合酶链式反应 (2)作用：特异性地快速扩增目的基因。 (3) 的概念： 在_____提供参与 复制的各种组分与反应条件，对目的基因的 核苷酸序列进行大量复制的技术。 体外 (4) 的原理：_____。 半保留复制 (5)扩增的过程： 重复循环多次，每次循环一般可以分为_____三步。 变性、复性、延伸 (6) 产物的鉴定方法：常采用_____。 琼脂糖凝胶电泳 4.其他获取目的基因的方法:_____等。 人工合成、构建基因文库 任务一 利用 获取和扩增目的基因 【情境】 阅读教材P78 PCR反应过程示意图，分析下面内容。 (1)请完善图中信息。 变性 复性 两种引物 延伸 聚合酶 (2) 的条件是一定的缓冲液、_____、2种_____、4种_____ _____和_____酶等。 模板 引物 脱氧核苷酸 耐高温的聚合 (3) 所需引物是依据_____的一段已知序列设计而成的，图 中引物A与引物B_____(填“相同”或“不同”)，其在 过程中_____ (填“能”或“不能”)重复利用。 目的基因 不同 不能 (4)复性过程中引物与 模板结合，延伸过程中,4种脱氧核苷酸加 到引物的___端，新的 链的合成都遵循_____原则。 碱基互补配对 (5) 反应中，下一次循环的模板是_____。 上一次循环的产物 (6)结果： 反应需要重复循环多次，每一次循环后目的基因的量 可以增加_____，即呈_____形式扩增，至少经____轮循环才可得 到所需目的基因。 一倍 指数 三 (7)用_____(填“能”或“不能”)扩增 ，原因是_____ _____。 不能 需要逆转录成再进行扩增 1.技术与生物体内 复制的比较 不同 点 解旋方 式 解旋酶催化 场所 生物体外 主要在细胞核内 引物 不同 点 酶 温度条 件 需控制温度，在较高温度下进 行 细胞内温和的温度条 件 结果 （续表） 相同 点 原理 原料 四种脱氧核苷酸 条件 都需要模板、酶、引物等 （续表） ［注意］ (1)真核细胞和细菌的聚合酶都需要用激活，因此 反应 缓冲液中一般要添加 。 (2)在反应中实际用到的原料是 (脱氧核糖核苷三磷酸)，包 括，，， 。其作用是提供能量和原料，不需要 单独加 。 2.由逆转录形成 的过程 例1 利用将某小段含目的基因的分子扩增循环 次，则 ( ) A.需要已知目的基因的全部序列以便设计引物 B.共需个引物参与子代 分子的合成 C.应向反应体系中加入解旋酶、 聚合酶、缓冲液等 D.耐高温的聚合酶可将脱氧核苷酸与引物 端相连 √ [解析] 只需要已知目的基因两端的序列便可设计引物，A错误； 扩增循环次共需两种引物的数量为 ，B错误； 不需向的反应体系中加入解旋酶，在体外通过高温使双链 解 聚为单链，C错误；耐高温的 聚合酶可将游离的脱氧核苷酸连接 到引物的 端，D正确。 例2 [2024·山东青岛模拟] 作为一个体外酶促反应，其效率和特 异性取决于两个方面，一是引物与模板的特异性结合，二是多聚酶 对引物的延伸。引物设计的总原则是提高扩增的效率和特异性。下 列有关叙述错误的是( ) A.引物长度过短，特异性降低 B.两种引物之间不能发生碱基互补配对 C.引物的含量越高，越利于目标 的扩增 D.可在引物的 端添加特 ... ...
